實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血對(duì)側(cè)腦室脈絡(luò)叢和海馬組織結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、蛛網(wǎng)膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH),是一種常見的急性出血性腦血管病變。目前在我國,其發(fā)病率約為10.5/10萬人年,約占腦血管病總發(fā)病率的9.0％～22.4％。SAH的死亡率高達(dá)40％～50％,而存活者中46％有明顯的認(rèn)知功能障礙,嚴(yán)重影響正常生活。SAH可引起多種并發(fā)癥,其中出血后再出血、腦血管痙攣和腦積水最為常見,且能造成嚴(yán)重的腦損害。近年來人們通過大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床觀察,對(duì)SAH后三大并發(fā)癥

2、的發(fā)生機(jī)制,以及它們?cè)斐赡X損害的機(jī)制進(jìn)行研究,并得出了較多的假說,但是,目前尚無統(tǒng)一的假說能解釋SAH后的所有事件。
　　 腦脊液(cerebralspinal fluid,CSF)循環(huán),素有人體第三循環(huán)之稱。目前在研究腦積水,顱高壓、顱內(nèi)出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血等中樞神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性疾病的發(fā)生機(jī)制和防治上均有重要意義。眾所周知,脈絡(luò)叢存在于腦室內(nèi),是產(chǎn)生腦脊液的主要結(jié)構(gòu),產(chǎn)生的腦脊液約占其總量的80％～85％。脈絡(luò)叢的結(jié)構(gòu)以毛細(xì)血管

3、網(wǎng)為中心,周圍為結(jié)締組織,外層覆以室管膜上皮即脈絡(luò)叢上皮,后者具有活躍的分泌功能。脈絡(luò)叢的結(jié)構(gòu)改變,會(huì)直接影響腦脊液的產(chǎn)生,從而造成CSF循環(huán)障礙。海馬位于側(cè)腦室下角的底和內(nèi)側(cè)壁,與腦脊液僅有一層室管膜相隔。其與下托、齒狀回和海馬殘件共同構(gòu)成海馬結(jié)構(gòu)。海馬結(jié)構(gòu)與學(xué)習(xí)、記憶、認(rèn)知功能有關(guān),尤其是短期記憶與空間記憶,此外還具有控制感情、行為及神經(jīng)內(nèi)分泌的功能。而且與Alzheimer病(AD)、顳葉癲癇、某些精神疾病等密切相關(guān)。它們都與腦脊

4、液有著緊密的關(guān)系,SAH后大量血液進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔或腦室內(nèi),勢必影響正常的CSF循環(huán),進(jìn)而CSF的改變可能會(huì)對(duì)脈絡(luò)叢和海馬的組織結(jié)構(gòu)造成影響。
　　 目的:近年來,人們比較注重于腦血管痙攣在SAH發(fā)病急性期造成腦損害的研究,但是,很少有人關(guān)注其它并發(fā)癥以及SAH急性發(fā)病后期所造成的腦損害。所以,本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后期的大鼠,側(cè)腦室脈絡(luò)叢和海馬細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的形態(tài)學(xué)觀察,為實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血對(duì)脈絡(luò)叢和海馬的損害機(jī)

5、制的研究,提供形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　 方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與取材：
　　 選用成年SD大鼠35只,體重300～400g,雌雄不拘,由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為預(yù)實(shí)驗(yàn)組(手術(shù)5只)、實(shí)驗(yàn)組(手術(shù)20只)和對(duì)照組(假手術(shù)10只);預(yù)實(shí)驗(yàn)組和實(shí)驗(yàn)組大鼠用6％水合氯醛(0.5ml/100g)腹腔注射麻醉后,于枕大池注入其自體動(dòng)脈血0.3ml,制作模擬蛛網(wǎng)膜下腔出血的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。術(shù)后的預(yù)實(shí)驗(yàn)組大

6、鼠,24小時(shí)后取材用于評(píng)估模型情況;實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠常規(guī)喂養(yǎng),兩個(gè)月后經(jīng)主動(dòng)脈灌注固定取材,用于光鏡和電鏡組織樣品的制備。
　　 2、光鏡樣品制備與觀察：
　　 將醛類固定液固定好的完整的大鼠腦,經(jīng)從低至高濃度梯度乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,組織切片,再行常規(guī)HE染色和光鏡觀察;以顯示側(cè)腦室脈絡(luò)叢和海馬的細(xì)微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　　 3、掃描電鏡樣品制備與觀察：
　　 將固定的脈絡(luò)叢和海馬組織標(biāo)本,進(jìn)行常規(guī)

7、掃描電鏡樣品制備。通過掃描電鏡觀察,以揭示脈絡(luò)叢和海馬表面結(jié)構(gòu)特點(diǎn),以及實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血對(duì)其表面結(jié)構(gòu)的影響。
　　 4、透射電鏡樣品制備與觀察：
　　 醛類固定液固定的脈絡(luò)叢和海馬組織標(biāo)本,行常規(guī)透射電鏡樣品制備,超薄組織切片,進(jìn)行透射電鏡觀察;揭示脈絡(luò)叢和海馬組織的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn),以及實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血對(duì)其超微組織結(jié)構(gòu)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、大體觀察結(jié)果顯示：
　　 大鼠蘇醒后精神

8、萎靡、反應(yīng)遲鈍、嗜睡,呈頭低位蜷縮狀,飲水和攝食量減少,毛發(fā)雜亂,自結(jié)性差,并與7天左右逐漸恢復(fù)。在預(yù)實(shí)驗(yàn)組大鼠的腦標(biāo)本,均見血液或血凝塊分布于蛛網(wǎng)膜下腔,血凝塊多沉積于腦干背側(cè)、顱底以及基底池;大腦半球表面也可見到血液沉積。
　　 2、石蠟包埋組織切片HE染色光鏡觀察顯示：
　　 (1)預(yù)實(shí)驗(yàn)組:蛛網(wǎng)膜下腔變寬,其內(nèi)可見大量的紅細(xì)胞。(2)實(shí)驗(yàn)組:脈絡(luò)叢的毛細(xì)血管未見異常改變,周圍結(jié)締組織間隙略有增寬,脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞內(nèi)

9、出現(xiàn)大量的空泡,胞體形狀不規(guī)則,細(xì)胞之間界限不清晰。海馬表面的室管膜結(jié)構(gòu)未見改變。在海馬槽和多形細(xì)胞層,可見到小血管周隙明顯增寬。錐體細(xì)胞層明顯變薄,細(xì)胞數(shù)量減少,而且細(xì)胞排列紊亂、間隙增寬。
　　 3、掃描電鏡觀察顯示：
　　 脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞表面,出現(xiàn)大量的火山口樣的凹陷,還可見凹陷周圍有些正常上皮細(xì)胞上出現(xiàn)大量的分泌泡,而另一些細(xì)胞的微絨毛萎縮、扭曲甚至脫落。在襯覆海馬的室管膜,其細(xì)胞表面纖毛未發(fā)現(xiàn)異常,而其微絨毛大

10、量減少甚至缺如。
　　 4、透射電鏡觀察顯示：
　　 脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞內(nèi)可見大量的吞飲泡,胞體和胞核均不規(guī)則,核內(nèi)異染色質(zhì)增多,胞質(zhì)內(nèi)可見大量的初級(jí)和次級(jí)溶酶體,可偶見腫脹的線粒體。海馬室管膜細(xì)胞表面的微絨毛減少,未見到分泌泡。大量的脂質(zhì)蛋白沉積于血管周隙、神經(jīng)纖維、膠質(zhì)細(xì)胞和錐體細(xì)胞間隙,錐體細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)蛋白沉積較為少見。錐體細(xì)胞層的錐體細(xì)胞之間間隙增寬,細(xì)胞密度減少。
　　 結(jié)論:
　　 1、枕大池單次

11、注血法可以成功建立SAH模型,并且模型病理改變較為一致,可以較為真實(shí)的模擬SAH的病理過程。
　　 2、實(shí)驗(yàn)性SAH造成了側(cè)腦室脈絡(luò)叢的空泡樣變,其原因考慮為CSF障礙所致,然而,脈絡(luò)叢的結(jié)構(gòu)改變勢必會(huì)影響CSF循環(huán)。
　　 3、實(shí)驗(yàn)性SAH引起海馬CA1區(qū)的脂質(zhì)蛋白沉積,以及錐體細(xì)胞的減少。前者可能與腦脊液運(yùn)行不暢,致使海馬CA1區(qū)細(xì)胞代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)運(yùn)障礙有關(guān),后者考慮為缺血所引起的細(xì)胞凋亡加速。這些結(jié)構(gòu)改變會(huì)對(duì)海馬的功能