狐膽汁HPLC分析及其對心肌抗氧化損傷的研究.pdf

1、本文以藍狐（Alopex Lagopus）膽囊膽汁為實驗材料，RP-HPLC法分析狐膽汁成分，探討狐膽汁對H2O2誘導(dǎo)的乳鼠心肌細胞抗氧化損傷的作用。研究內(nèi)容與方法:①采用正交試驗優(yōu)化狐膽汁RP-HPLC條件。②建立原代培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞H2O2氧化損傷模型，不同濃度狐膽汁預(yù)處理心肌細胞后，MTT法檢測細胞存活率。③采用生化方法測定乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧酶(SOD)、丙二醛(MDA)和還原型谷胱甘肽(GSH)的水平，分析狐膽汁

2、對心肌細胞抗氧化損傷的作用。
　　結(jié)果:①用色譜柱HypersiL BDS C18（4.6mm×250mm，5μm）為固定相，V（甲醇）∶V（30mmol/L磷酸二氫鉀）=70∶30的溶液(pH=3.8)為流動相進行等度洗脫，流速為1.0mL/min，檢測波長為205nm，柱溫25℃，分離獲得狐膽汁含?；悄懰岷团；蛆Z去氧膽酸兩種結(jié)合型膽汁酸，其峰面比分別為35.05％和9.23％，但未檢測到游離型膽汁酸。各組分在3.33～10g/

3、L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。②MTT法檢測細胞存活率，結(jié)果表明:隨著H2O2濃度增加，細胞存活率逐漸降低，與H2O2呈濃度依賴關(guān)系。當H2O2濃度為400μmol/L，作用6h后，細胞存活率為57.78％，建立氧化損傷模型。不同濃度(100、200、400μg/mL)狐膽汁組與H2O2損傷組相比，其心肌細胞存活率顯著高于H2O2損傷組(P＜0.05)。③生化分析表明:H2O2誘導(dǎo)使細胞膜通透和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，培養(yǎng)液中LDH活性（13

4、6.31±18.94U/L）和細胞內(nèi)MDA含量(28.53±0.46nmol/mgprot)分別顯著高于對照組（42.24±2.143U/L，11.33±0.494nmol/mgprot），差異顯著（P＜0.05），細胞SOD活力（24.24±2.776U/mL）和GSH含量（48.59±0.8392μmol/gprot）分別顯著低于對照組（39.43±0.7404U/mL、59.85±1.751μmol/gprot）(P＜0.05)。

5、狐膽汁可顯著降低H2O2所致LDH外漏和細胞內(nèi)MDA含量，400μg/mL劑量組（LDH52.68±5.056U/L，MDA12.58±0.7049nmol/mgprot）、200μg/mL劑量組（LDH69.11±0.5021U/L， MDA13.59±0.4672μmol/gprot）和100μg/mL劑量組（LDH101.94±0.1980U/L，MDA16.12±0.2305μmol/gprot）顯著低于H2O2損傷組(P＜0.

6、05)。狐膽汁可顯著提高細胞SOD活力和GSH含量，400μ g/mL劑量組（SOD36.81±0.5304U/mL， GSH56.77±1.619μmol/gprot）、200μg/mL劑量組（SOD35.10±0.6451U/mL，GSH54.46±0.9518）和100μg/mL劑量組（SOD31.84±0.2864U/mL，GSH51.92±1.023μmol/gprot）顯著高于H2O2損傷組(P＜0.05)。
　　綜上