肉桂黃酮類抗氧化活性成分的HPLC法識(shí)別及其成分分析.pdf

1、肉桂（Cinnamomum cassia Presl），又名玉桂，是一種樟科（Lauraceae）樟屬（Cinnamomum）喬木植物。原產(chǎn)于中國，主要分布在廣西、廣東、云南等地，另外，國外的斯里蘭卡、越南等地也有盛產(chǎn)。肉桂因具有特殊的香味而常被用作食品調(diào)味料，亦可作藥用，具有散寒止痛、溫經(jīng)通脈等多種功效，是一種純天然的藥食兩用植物資源。研究結(jié)果表明，肉桂中具有多種類型的成分，如：揮發(fā)油、二萜、黃烷醇及其多聚體化合物、黃酮及其苷類、多糖

2、、木質(zhì)素等。目前，對(duì)于肉桂的研究以揮發(fā)油為主，而對(duì)其中的黃酮類化合物的研究較少。黃酮類化合物是發(fā)揮抗氧化作用的主要成分，因而通過對(duì)肉桂中的化學(xué)成分及其抗氧化活性等相關(guān)研究，可進(jìn)一步了解肉桂這種天然資源的開發(fā)利用價(jià)值。
　　本課題主要包括以下四個(gè)部分：
　?。?）利用超聲-微波協(xié)同提取儀提取肉桂黃酮類化合物，通過單因素實(shí)驗(yàn)篩選出影響提取率的顯著因素，并采用響應(yīng)面法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)72％，液料

3、比28:1，萃取溫度66℃，微波功率300 W，萃取時(shí)間6 min，超聲功率50 W。在此條件下，肉桂黃酮的得率為5.62%，純度為26.46%。
　?。?）通過靜態(tài)純化法得到D101和NKA-9兩種大孔樹脂的吸附曲線，選擇吸附量更大的D101大孔樹脂作為后續(xù)進(jìn)行動(dòng)態(tài)大量純化的載體。采用動(dòng)態(tài)純化法確定最佳條件為：上樣液濃度1.0 mg/mL、樣品液吸附流速為2 BV/h、洗脫流速為3 BV/h、乙醇洗脫劑為70%。經(jīng)純化后采用分光

4、光度法顯色測(cè)定并計(jì)算得到肉桂黃酮純度從純化前的26.46%增加到49.26%，肉桂黃酮的純化得率為21.5%。通過制備色譜對(duì)經(jīng)大孔樹脂純化后的肉桂總黃酮作進(jìn)一步的純化分離并得到兩個(gè)組分。
　?。?）采用Agilent G6410A液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)肉桂總黃酮成分進(jìn)行了定性及定量分析。通過與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間及特征碎片進(jìn)行比對(duì)，鑒定出7種黃酮類物質(zhì)，分別為沒食子酸（4.36μg/mg）、原花青素B2（112.55μg/mg）、表

5、兒茶素（75.95μg/mg）、原兒茶醛（7.10μg/mg）、蘆丁（5.30μg/mg）、金絲桃苷（0.54μg/mg）、鞣花酸（7.25μg/mg）。又根據(jù)碎片離子、裂解規(guī)律及相關(guān)文獻(xiàn)推斷出5種物質(zhì)，分別為A型原花青素二聚體（1.17μg/mg）、A型原花青素三聚體（34.95μg/mg）、沒食子?；?鞣花?；咸烟牵?01.83μg/mg）、槲皮素-3-葡萄糖醛酸苷（0.86μg/mg）、槲皮素-3-O-木糖苷（1.41μg/mg

6、）。
　?。?）采用傳統(tǒng)分光光度法和細(xì)胞模型法評(píng)價(jià)了經(jīng)制備色譜分離純化的肉桂黃酮兩組分的抗氧化活性，并與同濃度的兩種食品加工中常用的抗氧化劑Vc和PG作了比較。結(jié)果表明，肉桂黃酮兩組分在清除超氧陰離子自由基方面能力強(qiáng)于PG，在抑制卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化能力上優(yōu)于Vc。且組分1清除其他幾種自由基的活性都強(qiáng)于組分2。在細(xì)胞模型抗氧化實(shí)驗(yàn)中，肉桂黃酮兩組分在濃度范圍為1-100μg/mL內(nèi)幾乎無細(xì)胞毒性，且肉桂黃酮組分1比組分2具有更好的