抗氧化乳酸菌的篩選及其對氧化損傷的CT-26細胞的保護作用.pdf

1、目的：從乳酸發(fā)酵食品中分離篩選具有較高抗氧化活性的乳酸菌，研究其抗氧化能力并初步探討其作用機制，為開發(fā)功能性乳制品提供理論依據(jù)。
　　 方法：以體外清除DPPH的能力為指標，在相同菌量條件下，從32株受試菌株中篩選出具抗氧化活性的乳酸菌，正交實驗優(yōu)化其發(fā)酵條件，以最大程度上提高其抗氧化水平。小鼠結(jié)腸癌細胞CT-26傳代培養(yǎng)后分為對照組、模型組和乳酸菌干預(yù)組。模型組用含0.45mmol/LH2O2(終濃度)的RPMI-1640培養(yǎng)

2、基作用于細胞2h建立損傷模型，干預(yù)組將109cfu/mL的具抗氧化活性的乳酸菌與含0.45mmol/LH2O2的RPMI-1640培養(yǎng)基于37℃孵育3h，過濾除菌后取上清作用于細胞2h，分別測定各組細胞活力(MTT法)，測定上清液LDH、MDA及SOD含量，掃描電鏡觀察細胞表面形態(tài)，Hoechest33342染色檢測細胞核變化，HepG2細胞輔助驗證受試菌對其保護作用。
　　 結(jié)果：從受試的32株乳酸菌株中，篩選得到一株具有較強

3、抗氧化能力的嗜酸乳桿菌874，DPPH清除率在35％左右。利用單因素實驗，以發(fā)酵得到的菌體的DPPH清除率為指標，從接種量、培養(yǎng)基初始pH值、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、吐溫種類、生長因子種類及添加量，碳、氮源種類及添加量等多個方面對篩得菌株的生長條件進行了優(yōu)化，并就碳、氮源及生長因子(乳糖和豆芽汁)添加量等對清除DPPH自由基影響較大的因素進行了正交實驗，確定了篩得菌株的優(yōu)化培養(yǎng)基及最佳培養(yǎng)條件。優(yōu)化培養(yǎng)基成分為乳糖1％，豆芽汁12.5％，葡

4、萄糖2.5％，蛋白胨∶牛肉浸膏=1∶1，其余同MRS培養(yǎng)基。最佳培養(yǎng)條件為：接種量為3％，培養(yǎng)基初始pH值為6.4，37℃下發(fā)酵20h，吐溫-80作為促生長因子。經(jīng)優(yōu)化后，菌株DPPH清除率由(35.15±0.49)％左右增至(66.70±0.42)％，清除羥自由基的能力由(19.60±0.99)％提高至(33.30±1.84)％，還原能力由(105.75±1.34)％增至(159.50±22.20)％。體外細胞培養(yǎng)研究結(jié)果表明：干預(yù)組

5、細胞活力顯著高于模型組(P＜0.01)，培養(yǎng)上清液中LDH及MDA含量顯著低于模型組(P＜0.01)，SOD含量高于模型組(P＜0.01)；掃描電鏡下模型組細胞表面微絨毛消失，出現(xiàn)大量凋亡小體，干預(yù)組形態(tài)接近正常；模型組經(jīng)Hoechst-33342熒光染色可見明顯的顆粒狀和固縮狀熒光，干預(yù)組呈彌漫均勻熒光。
　　 結(jié)論：篩選得到1株嗜酸乳酸菌，經(jīng)優(yōu)化其DPPH清除率達(66.70±0.42)％，羥自由基清除率為(33.30±1.