Apelin-13在大鼠心肌缺血-再灌注損傷中抗氧化應(yīng)激及其對(duì)心臟功能的保護(hù)作用.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究Apelin-13對(duì)離體大鼠心臟心肌缺血-再灌注（I/R）損傷中氧化應(yīng)激狀態(tài)及心臟機(jī)械功能的影響，探討Apelin-13能否改善I/R損傷中氧化應(yīng)激狀態(tài)、心臟功能及其可能機(jī)制。
　　方法：選取250g-350g的SD雄性大鼠98只做為研究對(duì)象，年齡8周齡，購(gòu)自南華大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，將研究對(duì)象隨機(jī)分為7個(gè)組（n=14）：①對(duì)照組（Control組）用充氧的K-H液灌流60min；② I/R組，Control組停止

2、灌流30min以制造心臟缺血，然后用標(biāo)準(zhǔn)灌流液復(fù)流30min；③IR+ Ap組，心臟在停止灌流前用Apelin（濃度100 nmol/L)處理10min，并在隨后的30min再灌注過(guò)程中持續(xù)給予；④I/R+AP+CHE組，在(I/R+AP組)基礎(chǔ)上加入 PKC抑制劑chelerythrine(CHE,5 umol/L)；⑤I/R+AP+LY組，在(I/R+AP組)基礎(chǔ)上加入PI3K抑制劑LY-294002(LY,50 umol/L)；⑥

3、I/R+Ap+εV1-2組，在（I/R+AP）基礎(chǔ)上加入特異的PKCε抑制劑εV1-2(εV1-21 umol/L;)；⑦I/R+AP+5HD組，在(I/R+AP)基礎(chǔ)上加入mitoKATPchannel阻斷劑5-hydroxydecanoate(5HD,100 umol/L)。將心臟主動(dòng)脈與心臟灌流裝置（Langendorff）相連接，進(jìn)行逆向灌流。采用Global缺血30min再灌注30min的I/R模型，同時(shí)記錄冠脈血流量,左室收

4、縮壓(LVSP)，左心室舒張壓(LVDP)，左室舒張末期壓（LVEDP）及心室率（HR）。使用多種方法測(cè)量心臟氧化應(yīng)激狀態(tài)。熒光DCFH負(fù)載單個(gè)心肌細(xì)胞測(cè)量ROS含量；western blot檢測(cè)分析SERCA和RyR的氧化修飾水平；微孔過(guò)濾器法計(jì)算SERCA介導(dǎo)的Ca2+攝取，液體閃爍計(jì)數(shù)法檢測(cè)3H-ryanodine結(jié)合力；采用SPSS18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：Apelin-13降低大鼠心肌I/R過(guò)程中LDH

5、水平，升高LVSP，LVDP，HR，降低LVEDP。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Apelin-13改善I/R過(guò)程中氧化還原狀態(tài)及降低單細(xì)胞內(nèi) ROS水平，降低 SERCA酪氨酸硝化水平，升高SERCA與RyR的GSH水平，恢復(fù)SERCA介導(dǎo)的肌漿網(wǎng)Ca2+吸收，以及增加RyR同3H-ryanodine的結(jié)合力促進(jìn)Ca2+釋放，從而穩(wěn)定心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+平衡；經(jīng)PI3K，PKC，PKCε，mitoKATP channel抑制劑預(yù)處理后，Apelin-1