益骨膠囊含藥血清對成骨細胞ER和IL-6影響的研究.pdf

1、　　目的：
　　運用中藥血清藥理學(xué)方法體外觀察益骨膠囊含藥血清對新生大鼠成骨細胞增殖、分化、礦化的影響,探討制備含藥血清的時效和量效關(guān)系。同時從mRNA水平及蛋白水平研究益骨膠囊含藥血清對成骨細胞ER和IL-6表達的影響,試圖從雌激素調(diào)控途徑探討益骨膠囊防治骨質(zhì)疏松癥的機理。
　　方法：
　　(1)將12月齡SD大鼠分40只,隨機分為4組(益骨膠囊高、中、低劑量組和生理鹽水組),制備含藥血清和空白對照血清；(2)分離培

2、養(yǎng)新生SD大鼠的OB,采用MTT法、分光光度計比色法和茜素紅染色法,分別測定3組即敏感濃度含藥血清組(高劑量稀釋比1：4)、空白滅活對照血清組和DMEM培養(yǎng)液組對OB增殖、分化和礦化的影響；(3)用RT-PCR技術(shù)和RBA法分別檢測3組對OB表達ERαmRNA、ERβmRNA及其蛋白的影響；(4)用RT-PCR技術(shù)和RIA試劑盒分別檢測3組對OBIL-6mRNA及其蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)末次灌胃后1.5h采

3、血的MTT值和同組其它時間比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；血清添加濃度為25%時高劑量組MTT值最高,和其它組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(2)益骨膠囊含藥血清組ALP值及OB礦化結(jié)節(jié)數(shù)量均明顯高于空白血清對照組及培養(yǎng)液組(P<0.05)。(3)益骨膠囊含藥血清組ERα/β-actin的灰度積分值和對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；ERβ/β-actin高于對照組(P<0.05)；IL-6/β-actin低于對照組(P

4、<0.05)。(4)益骨膠囊含藥血清組KD值和對照組比較不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；RT值明顯高于對照組(P<0.01)。(5)益骨膠囊含藥血清組IL-6含量明顯低于對照組(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　益骨膠囊含藥血清能促進成骨細胞增殖、分化、礦化；能上調(diào)OB ERβmRNA表達,增加ER蛋白數(shù)量；能下調(diào)OB IL-6mRNA表達,抑制OB分泌IL-6；這提示益骨膠囊主要通過ERβ來發(fā)揮類雌激素作用。它能促進體外