研究肺癌細(xì)胞EMT發(fā)生前后對(duì)成骨細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:應(yīng)用微流控芯片技術(shù)，構(gòu)建一個(gè)人肺腺癌細(xì)胞A549、成纖維細(xì)胞WI38及人成骨細(xì)胞hFOB共培養(yǎng)模型。研究成纖維細(xì)胞WI38對(duì)肺癌細(xì)胞A549發(fā)生EMT的促進(jìn)作用，以及發(fā)生EMT的A549細(xì)胞對(duì)hFOB細(xì)胞表達(dá)RANKL蛋白的影響（RANKL可促進(jìn)破骨細(xì)胞成熟），進(jìn)而比較A549細(xì)胞發(fā)生EMT前后影響成骨細(xì)胞hFOB該蛋白表達(dá)的差異，為臨床干預(yù)腫瘤細(xì)胞EMT發(fā)生及緩解肺癌骨轉(zhuǎn)移引起的溶骨性癥狀提供治療參考。
　　方法:應(yīng)用微流

2、控芯片技術(shù)，構(gòu)建一個(gè)共培養(yǎng)平臺(tái)，芯片結(jié)構(gòu)包括微通道，細(xì)胞培養(yǎng)室，進(jìn)液孔與出液孔。在芯片中分別培養(yǎng)包括肺腺癌細(xì)胞A549、成纖維細(xì)胞WI38、成骨細(xì)胞hFOB在內(nèi)的3種細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)對(duì)象共分為3組，分別為對(duì)照組:hFOB單獨(dú)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組1:A549與人類成骨細(xì)胞hFOB共培養(yǎng)以及實(shí)驗(yàn)組2:發(fā)生EMT的A549與hFOB共培養(yǎng)。通過免疫熒光方法分別檢測對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2中人類成骨細(xì)胞hFOB膜蛋白R(shí)ANKL的表達(dá)差異，并通過常規(guī)Tra

3、nswell侵襲實(shí)驗(yàn)、Western blot檢測對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:1.將腫瘤細(xì)胞細(xì)胞A549與成纖維細(xì)胞WI38共培養(yǎng)后，可見A549發(fā)生EMT轉(zhuǎn)化。相關(guān)蛋白如E-Cadherin表達(dá)降低、Snail表達(dá)升高。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，發(fā)生EMT的A549侵襲能力增強(qiáng)。
　　2.將發(fā)生EMT的A549與成骨細(xì)胞hFOB共培養(yǎng)，E-Cadherein與Snail表達(dá)降低。Transwell實(shí)驗(yàn)證明細(xì)胞具有

4、向靶器官侵襲能力。
　　3.將對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2分別提取蛋白，行Western blot檢測成骨細(xì)胞RANKL蛋白，結(jié)果顯示A549細(xì)胞發(fā)生EMT前后均可使成骨細(xì)胞RANKL表達(dá)升高。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)通過微流控芯片技術(shù)，成功建立細(xì)胞共培養(yǎng)體系，模擬了腫瘤微環(huán)境中成纖維細(xì)胞WI38對(duì)肺癌細(xì)胞A549的促EMT作用，并比較了A549發(fā)生EMT前后對(duì)成骨細(xì)胞hFOB的影響，從而證實(shí)A549細(xì)胞發(fā)生EMT前后均有促進(jìn)溶骨性