脈沖電磁場(chǎng)對(duì)成骨細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：
　　 一、研究脈沖電磁場(chǎng)（puslsed electromagnetic fields，PEMFs）對(duì)成骨細(xì)胞(Osteoblast，OB)的作用，探究PEMFs治療骨質(zhì)疏松的的作用機(jī)理。
　　 二、研究PEMFs對(duì)造血干細(xì)胞龕中的主要組成成分——ALCAM+Sca-1-成骨細(xì)胞的作用，探究PEMFs對(duì)造血干細(xì)胞歸巢的作用。
　　 方法：
　　 一、取新生SD大鼠頭蓋骨，通過(guò)骨組織塊培養(yǎng)法分離、培

2、養(yǎng)成骨細(xì)胞。取傳代第三代細(xì)胞分為5組：1-70組、2-70組、3-70組、4-70組、對(duì)照組，其中前4組為作用組，分別接受1mT，70Hz;2mT，70Hz;3mT，70Hz;4mT，70Hz的PEMFs作用，對(duì)照組不接受PEMFs作用，同PEMFs組一致置于相同環(huán)境下、磁場(chǎng)作用距離外。按照分組劑量進(jìn)行離體PEMFs作用(0.5h/d，連續(xù)作用4d)，作用結(jié)束后，對(duì)各組分別進(jìn)行細(xì)胞堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，A

3、LP）活性、核結(jié)合因子α1(core-binding factoral，cbfal/RUNX2)表達(dá)、體外成骨能力指標(biāo)——礦化結(jié)節(jié)(mineralized nodules)形成能力檢測(cè)。
　　 二、24只C57/6小鼠隨機(jī)分為兩組：PEMF組和對(duì)照組，每組12只小鼠。PEMF組小鼠接受PEMFs作用，劑量為2mT，70Hz，1h/次，1次/d，對(duì)照組不接受PEMFs作用，同PEMFs組一致置于相同環(huán)境下、磁場(chǎng)作用距離外，1h/次

4、，1次/d。連續(xù)作用4w。作用結(jié)束后，兩組分別取股骨、脛骨，沖出骨髓(bone marrow，BM)后，研磨至碎片，經(jīng)膠原酶消化，收集細(xì)胞經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離，磁珠系統(tǒng)分選出CD31-CD45-TER119-細(xì)胞，再經(jīng)流式細(xì)胞儀分選ALCAM+Sca-1-成骨細(xì)胞。分選出的ALCAM+Sca-1-成骨細(xì)胞經(jīng)TRIzol法提取Total RNA，逆轉(zhuǎn)錄，基因芯片雜交，洗脫，檢測(cè)，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果：
　　 一、經(jīng)P

5、EMFs作用后，與對(duì)照組相比，成骨細(xì)胞ALP活性降低，cbfal表達(dá)增多，礦化結(jié)節(jié)數(shù)量顯著增多。
　　 二、經(jīng)PEMFs作用后，PEMF組與對(duì)照組相比，ALCAM+Sca-1-成骨細(xì)胞的基因上調(diào)表達(dá)成骨細(xì)胞功能相關(guān)基因，與造血干細(xì)胞歸巢相關(guān)的細(xì)胞粘附分子、趨化分子基因，調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞的細(xì)胞因子基因。
　　 結(jié)論：
　　 一、PEMFs作用成骨細(xì)胞可促進(jìn)成骨細(xì)胞功能分化，增強(qiáng)成骨細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)礦化。