吸入維生素A與布地奈德對(duì)難治性哮喘大鼠肺部病理及TSLP表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)長(zhǎng)期霧化吸入OVA建立大鼠難治性哮喘(Difficult asthma)模型，霧化吸入布地奈德(Budesonide)和維生素A(VitaminA,VA)作為干預(yù)因素，根據(jù)支氣管-肺、脾病理變化、Western-blotting法及熒光免疫組化法檢測(cè)肺組織胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin，TSLP)表達(dá)，探討維生素A和布地奈德對(duì)難治性哮喘的治療作用及對(duì)肺組織TSLP表達(dá)的影響。旨

2、在為臨床防治哮喘提供一些有價(jià)值的參考。 方法：實(shí)驗(yàn)第1天將48只成年雌性SD大鼠腹腔注射1 m1 0.1％OVA致敏，第8天再次腹腔致敏。第3周起所有動(dòng)物置于自制的86cm×40cm×40cm紙箱內(nèi)霧化吸入1％OVA進(jìn)行激發(fā)，每天1次，每次30分鐘，共4周。激發(fā)后第3周起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成三組：哮喘組、布地奈德組和維生素A組。三組于1％OVA激發(fā)后8小時(shí)分別進(jìn)行干預(yù)處理：布地奈德組霧化吸入0.02％布地奈德每次30分鐘，隔日1次

3、，共3次；維生素A組霧化吸入125011.J/ml維生素A，每次30分鐘，隔日1次，共3次；哮喘組霧化吸入90％乙醇，每次30分鐘，隔日1次，共3次。激發(fā)后第4周、第5周分批處死1/2數(shù)量的動(dòng)物。(1)制作大鼠支氣管肺病理切片，顯微鏡下觀察支氣管肺病理變化；(2)肺稱(chēng)重后勻漿，提取肺組織總蛋白，Western-blotting法檢測(cè)肺組織TSLP表達(dá)水平；(3)制作肺組織冰凍切片，熒光免疫組化法檢測(cè)肺組織TSLP表達(dá)。 結(jié)果：

4、(1)組織病理鏡檢：哮喘組：激發(fā)后第4周：氣管上皮杯狀細(xì)胞增多，黏膜下層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增多。肺內(nèi)氣道上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞增多，周?chē)g質(zhì)中淋巴細(xì)胞(Lymphocyte，LC)和嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophil，EOS)中.重度浸潤(rùn)，肺泡隔明顯增寬，肺泡腔有紅細(xì)胞(RBC)、LC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。激發(fā)后第5周：氣管假?gòu)?fù)層柱狀上皮，粘膜結(jié)締組織中浸潤(rùn)LC數(shù)量減少。肺間質(zhì)LC重度浸潤(rùn)，肺泡隔增寬程度有所減輕。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。維生

5、素A組：激發(fā)后第4周：氣管假?gòu)?fù)層上皮，粘膜結(jié)締組織內(nèi)LC增多。肺氣道杯狀細(xì)胞明顯增多，上皮細(xì)胞脫落，形成細(xì)胞栓，間質(zhì)EOS和LC重度浸潤(rùn)，肺泡隔明顯增寬，隔內(nèi)LC浸潤(rùn)，肺泡腔較多RBC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。激發(fā)后第5周：氣管假?gòu)?fù)層上皮，杯狀細(xì)胞較前減少，粘膜結(jié)締組織內(nèi)LC減輕，結(jié)構(gòu)大致正常。肺內(nèi)氣道上皮細(xì)胞恢復(fù)，基底層細(xì)胞完整，杯狀細(xì)胞明顯減少，周?chē)g質(zhì)LC重度浸潤(rùn)，肺泡腔內(nèi)僅有LC滲出。脾臟白髓LC區(qū)增生不明顯。布地奈德組：激

6、發(fā)后第4周：氣管假?gòu)?fù)層上皮，上皮細(xì)胞脫落較少，粘膜層浸潤(rùn)LC較少。肺內(nèi)氣道上皮中杯狀細(xì)胞明顯增多，周?chē)g質(zhì)中LC浸潤(rùn)較少，肺泡隔增寬。脾臟白髓LC區(qū)輕度增生。激發(fā)后第5周：肺內(nèi)氣道上皮中杯狀細(xì)胞明顯增多，周?chē)g質(zhì)LC重度浸潤(rùn)，肺泡隔增寬明顯，肺泡腔有LC和RBC滲出。脾臟白髓LC區(qū)中度增生。(2)Western-blotting檢測(cè)結(jié)果：激發(fā)后第4、5周組間比較均為哮喘組肺組織TsLP表達(dá)最高(3454.750±410.715，2985

7、.250±278.534)，其次維生素A組(3055.000±307.115，3016.500±342.573)，布地奈德組TSLP表達(dá)(2658.375±254.289，2297.500±134.481)最少(P<0.05)；同組比較，哮喘組及布地奈德組激發(fā)后第5周TSLP表達(dá)低于激發(fā)后第4周(P<0.05)，而維生素A組無(wú)明顯變化(P>0.05)。(3)熒光免疫組化結(jié)果：表達(dá)TSLP陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在肺泡和氣道周?chē)g質(zhì)內(nèi)。激發(fā)后第4

8、、5周組間比較均為哮喘組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目(39.875±4.224，35.375±3.926)(/1013505um2)高于維生素A組(35.125±2.748，37.875±2.167)，布地奈德組(30.875±1.808，28.500±1.927)最少(P<0.05)；同組比較，哮喘組及布地奈德組激發(fā)后第5周陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均低于激發(fā)后第4周(P<0.05)，而維生素A組激發(fā)后第5周高于激發(fā)后第4周(P<0.05)。 結(jié)論：(1)

9、霧化吸入維生素A對(duì)難治性哮喘大鼠肺部病理改變呈雙向性調(diào)節(jié)。能夠增加脾臟LC增生，肺LC的浸潤(rùn)，加重炎癥反應(yīng)，又通過(guò)減少杯狀細(xì)胞增生，氣道上皮和肺泡上皮結(jié)構(gòu)修復(fù)，加快炎癥消散速度，縮短病程。(2)難治性哮喘大鼠常伴有激素依賴(lài)的表現(xiàn)。布地奈德能夠減輕哮喘大鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，但停藥后炎癥復(fù)燃，病理變化明顯加重。(3)布地奈德具有很強(qiáng)的抑制TSLP表達(dá)的能力，作用持久。維生素A能夠抑制TSLP表達(dá)，但作用較弱。TSLP在難治性哮喘肺部表達(dá)明顯