布地奈德對(duì)哮喘小鼠一氧化氮合酶、內(nèi)皮素的影響.pdf

1、研究背景: 支氣管哮喘是以慢性氣道炎癥為基礎(chǔ)，氣道高反應(yīng)性(AHR)及氣道重塑為特征的一類疾病。反復(fù)的炎癥刺激引起的氣道重塑表現(xiàn)為氣道壁的增厚、氣道平滑肌的增生肥大及各種細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)的改變。在這一過程中，由一氧化氮合酶(NOS)合成的一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET)的表達(dá)異常起了重要作用。本研究通過對(duì)哮喘小鼠吸入布地奈德(BUD)，觀察其對(duì)NOS和ET的影響，以期探討其治療哮喘的可能機(jī)制。 目的: 利用成熟哮喘小鼠模型，觀

2、察吸入BUD對(duì)小鼠哮喘發(fā)作癥狀、氣道和肺部炎性細(xì)胞以及血清、支氣管肺泡灌洗液(BALF)、肺組織勻漿液中NOS、ET的影響，探討B(tài)UD治療哮喘的可能機(jī)制。 方法: 選取健康雌性BALB/c小鼠，6～8周齡，體重20～22克，隨機(jī)分為3組，每組10只： 哮喘模型組(A組)：以卵白蛋白(OVA)致敏及激發(fā)建立小鼠哮喘模型，在實(shí)驗(yàn)第1天、第8天、第15天于腹腔注射致敏原，第22天起持續(xù)7天予1％OVA溶液霧化吸入激發(fā)哮喘，每天

3、一次，每次30min。 BUD干預(yù)組(B組)：致敏及激發(fā)同模型組，在每次霧化激發(fā)前給予BUD霧化吸入。 正常對(duì)照組(C組)：以生理鹽水(NS)代替OVA。 觀察各組小鼠癥狀，于最后一次霧化激發(fā)后12小時(shí)收集BALF、外周血(PB)和肺組織，觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化，分別測定BALF及肺組織勻漿液中的白細(xì)胞(WBC)總數(shù)和Eos比例，采用放射免疫法測定血清、BALF、肺組織勻漿液中TNOS、iNOS、cNOS活性及

4、ET-1的水平。 結(jié)果: 1.霧化激發(fā)后小鼠癥狀 A組霧化激發(fā)后均出現(xiàn)煩躁不安、易驚、抓耳撓腮、毛發(fā)倒伏、大小便增多、呼吸增快、口唇發(fā)紺、腹部痙攣、弓背、最后伏俯不動(dòng)等急性過敏反應(yīng)，而B組及C組相對(duì)較安靜。 2.BUD干預(yù)對(duì)哮喘小鼠BALF、肺組織勻漿液中WBC總數(shù)、Eos比例的影響。 2.1 A組與C組比較 A組BALF及肺組織勻漿液中WBC總數(shù)、Eos比例均明顯高于C組，差異有顯著性意義(P＜0.01

5、)。 2.2 B組與A組比較 B組BALF及肺組織勻漿液中WBC總數(shù)、Eos比例較A組明顯降低，差異有顯著性意義(P＜0.01)。 2.3 B組與C組比較 B組BALF中WBC總數(shù)與C組相比較，無明顯差異(P＞0.05)，但BALF中Eos比例及肺組織勻漿液中WBC總數(shù)、Eos比例仍高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3.BUD干預(yù)對(duì)哮喘小鼠血清、BALF、肺組織勻漿液中TNOS、iNOS、cNOS活性

6、及ET-1水平的影響。 3.1 A組與C組比較 A組血清、BALF、肺組織勻漿液中 TNOS、iNOS、cNOS活性及ET-1水平明顯高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且肺組織勻漿液中水平＞血清中水平＞BALP中水平(P＜0.05)。iNOS與ET-1在肺組織勻漿液、血清、BALF中都呈明顯正相關(guān)關(guān)系(P＜0.01)。 3.2 B組與A組比較 B組血清、BALF、肺組織勻漿液中TNOS、iNOS、cNOS活性及

7、ET-1水平與A組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 3.3 B組與C組比較 B組血清、BALF、肺組織勻漿液中TNOS、iNOS、cNOS活性與C組相比，雖稍高于C組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。B組血清、BALF、肺組織勻漿液中ET-1水平仍高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 4.BUD干預(yù)對(duì)各組小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)影響。 4.1 A組與C組比較 A組病理學(xué)形態(tài)表現(xiàn)為支氣管痙攣

8、明顯，管壁、管腔間質(zhì)內(nèi)、粘膜下均有大量炎性細(xì)胞浸潤，氣道粘膜斷裂，氣道平滑肌增厚，血管充血、水腫明顯。杯狀細(xì)胞及黏液腺肥大增生，管腔內(nèi)可見黏液樣分泌物。 4.2 B組與A組比較 B組僅見支氣管管壁及周圍少量炎性細(xì)胞浸潤，未見支氣管痙攣、氣道平滑肌增厚及細(xì)胞增生肥大，管腔內(nèi)也未見黏液樣分泌物，較A組明顯改善。 4.3 B組與C組比較 B組支氣管及肺泡結(jié)構(gòu)未見明顯改變，大致接近于C組。 結(jié)論： 1.哮喘小鼠血

9、清、BALF、肺組織勻漿液中NOS活性及ET水平明顯增高，且在肺組織中表達(dá)最高，提示NOS和ET參與了哮喘的病理學(xué)變化。 2.哮喘急性發(fā)作時(shí)iNOS與ET呈直線正相關(guān)，提示iNOS與ET在哮喘時(shí)兩者相互促進(jìn)，協(xié)同作用，加重哮喘的發(fā)展。 3.BLD霧化吸入能顯著改善哮喘小鼠的癥狀及氣道炎性病理變化，抑制炎性細(xì)胞的表達(dá)，其作用的發(fā)揮可能與抑制哮喘小鼠BALF、血清特別是肺組織中NOS活性及ET-1水平有關(guān)，但并不完全。而氣道