VLA-4和CX3CR1在再生障礙性貧血患者T細(xì)胞遷移至骨髓中的作用研究.pdf

1、背景與目的：再生障礙性貧血（簡稱再障）是一種骨髓衰竭性疾病，以全血細(xì)胞減少和骨髓造血功能低下為特征。造血干細(xì)胞數(shù)量的減少和功能的異常是其發(fā)病的基礎(chǔ)。近年來研究表明再障是一種以造血組織為靶細(xì)胞的自身免疫性疾病，T細(xì)胞在骨髓介導(dǎo)的造血干/組細(xì)胞的破壞和凋亡是導(dǎo)致骨髓衰竭的關(guān)鍵因素。然而T細(xì)胞遷移到骨髓發(fā)揮免疫效應(yīng)與其表面粘附分子和趨化因子受體的表達(dá)密切相關(guān)。VLA-4、CX3CR1分別是已知的在T細(xì)胞遷移中發(fā)揮重要作用的粘附分子和趨化因子受

2、體。
　　 本研究通過檢測獲得性再障患者T細(xì)胞亞群表面VLA-4和CX3CR1的表達(dá)，以及相應(yīng)配體VCAM-1與Fractalkine的水平，探討與T細(xì)胞遷移相關(guān)的分子在再障發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：1．流式細(xì)胞術(shù)分析46例再障患者（20例重型再障，26例非重型性再障）、21例正常人外周血及骨髓中T細(xì)胞亞群的變化以及VLA-4、CX3CR1在T細(xì)胞亞群上的表達(dá)。
　　 2．流式細(xì)胞術(shù)分析11例再障患者（5例

3、重型再障，6例非重型性再障）、7例正常人CX3CR1與granzymeB在骨髓淋巴細(xì)胞的表達(dá)及其相互關(guān)系。
　　 3．激光共聚焦顯微鏡分析免疫熒光染色的15例重型再障患者及10例正常對照骨髓石蠟切片上T細(xì)胞表面VLA-4、CX3CR1的表達(dá)。
　　 4．RT-PCR分析46例再障患者（20例重型再障，26例非重型性再障）、21例正常人外周血及骨髓淋巴細(xì)胞中CX3CR1在mRNA水平的表達(dá)。
　　 5．ELISA方

4、法檢測46例再障患者（20例重型再障，26例非重型再障）、21例正常人外周血漿和骨髓中VCAM-1、Fractalkine水平。
　　 結(jié)果：1.1．再障患者T細(xì)胞亞群的變化：再障患者外周血中CD3+細(xì)胞比例基本正常(P＞0.05)，CD8+細(xì)胞比例明顯上升，CD4+細(xì)胞比例明顯下降(P＜0.01)；骨髓中CD3+、CD8+細(xì)胞比例均明顯升高(P＜0.01)，CD4+細(xì)胞比例減低僅在重型再障患者中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

5、r>　　 1.2．再障患者T淋巴細(xì)胞表面VLA-4、CX3CR1的表達(dá)：再障患者骨髓和外周血T細(xì)胞亞群表面VLA-4的表達(dá)與對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，然而骨髓和外周血中CD3+/CX3CR1+、CD3+/CD4+/CX3CR1+以及CD3+/CD8+/CX3CR1+細(xì)胞比例均高于對照組(P＜0.05)，尤其是CD3+/CD8+/CX3CR1+細(xì)胞比例升高尤為顯著(P＜0.01)。
　　 2．再障患者CX3CR1

6、與granzyme B在骨髓淋巴細(xì)胞的表達(dá)及兩者之間的關(guān)系：再障患者與對照組骨髓中CX3CR1與granzyme B在CD4+或CD8+細(xì)胞的表達(dá)均呈現(xiàn)高度一致性,CX3CR1陽性的CD4+或CD8+細(xì)胞幾乎均包含granzyme B。
　　 3．激光共聚焦顯微鏡分析再障患者骨髓活檢組織切片上T細(xì)胞表面VLA-4、CX3CR1的表達(dá)：再障患者經(jīng)免疫熒光染色的骨髓石蠟切片上CD4+或CD8+細(xì)胞表面VLA-4的平均熒光強(qiáng)度與正常對

7、照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但CD4+/CX3CR1+及CD8+/CX3CR1+細(xì)胞比例均升高，與對照組差異顯著(P＜0.01)，與流式結(jié)果一致。
　　 4．再障患者淋巴細(xì)胞中CX3CR1 mRNA表達(dá)水平：再障患者骨髓和外周血CD4+及CD8+細(xì)胞中CX3CR1 mRNA表達(dá)水平與正常對照組比較均升高(P＜0.05)，尤其是骨髓CD8+細(xì)胞中CX3CR1 mRNA表達(dá)顯著高于正常對照組(P＜0.01)。
　　 5．再障患者VCA

8、M-1、Fractalkine水平：再障患者骨髓和外周血漿中VCAM-1水平與對照組比較無明顯變化(P＞0.05)。而Fractalkine水平在重型與非重型再障患者骨髓中以及重型再障患者外周血漿中均升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：獲得性再生障礙性貧血作為一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，患者細(xì)胞免疫功能異常，輔助性T細(xì)胞(CD3+/CD4+)減少，細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD3+/CD8+)增多，T細(xì)胞升高表達(dá)趨化因子受體CX3CR