再生障礙性貧血調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能缺陷的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過檢測再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cells,Treg）數(shù)量及膜表面分子、核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子FOXP3表達(dá)，以及AA患者Treg細(xì)胞的轉(zhuǎn)化傾向，探討AA患者Treg細(xì)胞免疫抑制功能下降的原因及分子基礎(chǔ)。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)組為2014年5月-2015年1月之間就診于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院（血液學(xué)研究所）的AA患者共45例，男女比例5

2、:4（25男，20女）,中位年齡31（6-77）歲，其中非重型再生障礙性貧血（non-SAA）6例，重型再生障礙性貧血（SAA）25例，極重型再生障礙性貧血（VSAA）14例。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測AA患者外周血Treg細(xì)胞比例、核內(nèi)FOXP3及Treg細(xì)胞膜表面抗原的表達(dá)情況；應(yīng)用PMA/Ionomycin法檢測AA患者外周血Treg細(xì)胞免疫可塑性。
　　應(yīng)用SPSS17.0做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,單因

3、素方差分析（one-way ANOVA）比較組間差異，P<0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，GraphPad Prime5作圖。
　　結(jié)果：
　　1. AA患者外周血Treg細(xì)胞比例下降，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2. AA患者Treg細(xì)胞膜表面標(biāo)志CD39，CD73，PD-1陽性表達(dá)率升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3. AA患者功能性FOXP3+Treg膜表面抗原表達(dá)異常。
　　1) AA患者FOXP3+

4、Treg細(xì)胞中膜表面標(biāo)記CD39，CD73，PD-1陽性表達(dá)率升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而FOXP3-Treg細(xì)胞中CD39，CD73，PD-1陽性表達(dá)率升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2) AA患者Treg細(xì)胞中CD28+FOXP3+Treg、TIGIT+FOXP3+Treg細(xì)胞比例下降，而CD39+FOXP3+Treg、CD73+FOXP3+Treg、PD-1+FOXP3+Treg細(xì)胞比例升高，以上均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CTLA-4+FOXP

5、3+Treg細(xì)胞比例下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4. AA患者FOXP3+Treg細(xì)胞抗原表達(dá)存在組間差異。
　　1)與健康對照組相比，除了non-SAA，AA患者SAA、VSAA兩亞群患者CD28+FOXP3+Treg細(xì)胞比例下降、CD39+FOXP3+Treg細(xì)胞比例升高，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而AA患者組間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2)與健康對照組相比，VSAA亞群患者CD73+FOXP3+Treg升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，n

6、on-SAA、SAA無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，AA患者組間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3) TIGIT+FOXP3+Treg、CTLA-4+FOXP3+Treg細(xì)胞比例在健康對照、non-SAA、SAA、VSAA各組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但仍可見AA患者TIGIT+FOXP3+Treg、CTLA-4+FOXP3+Treg比例下降趨勢。
　　5.經(jīng)過PMA/Ionomycin方法刺激的AA患者Treg細(xì)胞胞內(nèi)因子IFN-r表達(dá)量增加，IL-4因子

7、表達(dá)量下降，IL-17A因子表達(dá)量未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.AA患者Treg細(xì)胞比例下降，且與疾病嚴(yán)重性相關(guān)；FOXP3表達(dá)下降，Treg細(xì)胞免疫抑制功能缺陷。
　　2. AA患者Treg細(xì)胞膜表面受體表達(dá)異常，一定程度上參與AA患者免疫抑制功能缺陷。
　　3. AA患者功能性FOXP3+Treg膜表面標(biāo)志表達(dá)異常是該人群Treg免疫抑制功能下降的原因之一。
　　4. AA患者Treg細(xì)胞IFN