農(nóng)桿菌介導(dǎo)ClCBF4基因轉(zhuǎn)化地被菊‘紫妍’的研究.pdf

1、地被菊是近年來(lái)興起的一個(gè)菊花新品種群，具有植株矮小、花期長(zhǎng)、花型緊密等觀賞特性，同時(shí)也具有較強(qiáng)的抗寒、抗旱、耐鹽堿等優(yōu)勢(shì)。越來(lái)越多的學(xué)者利用分子生物學(xué)技術(shù)，將抗性因子轉(zhuǎn)入地被菊中以提高抗逆性，使其具有更長(zhǎng)的花期，在綠化過(guò)程中發(fā)揮更加重要的作用。本研究以這一目的為目標(biāo)，在進(jìn)行了ClCBF4基因功能分析的基礎(chǔ)上，利用組織培養(yǎng)技術(shù)篩選出葉片分化率較高的地被菊品種，建立良好的遺傳轉(zhuǎn)化體系后，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將甘菊ClCBF4基因轉(zhuǎn)入地被菊中，旨

2、在獲得具有優(yōu)良穩(wěn)定性的轉(zhuǎn)基因植株。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1、將轉(zhuǎn)基因與野生型擬南芥在干旱、高鹽、低溫環(huán)境下進(jìn)行逆境脅迫處理，在種子萌發(fā)率、種子根長(zhǎng)、苗期形態(tài)、生理指標(biāo)方面進(jìn)行了ClCBF4基因的功能驗(yàn)證。結(jié)果表明:在較高濃度的干旱和鹽脅迫下，轉(zhuǎn)基因擬南芥的種子萌發(fā)率和根長(zhǎng)量均明顯高于野生型，但冷脅迫下的二者并沒(méi)有表現(xiàn)出明顯變化。在苗期的試驗(yàn)中，轉(zhuǎn)基因植株在受到三種逆境脅迫時(shí)受傷害程度不明顯，保持較強(qiáng)的生命力。試驗(yàn)測(cè)定的酶生理指標(biāo)與表

3、型分析相符，野生型擬南芥的酶活性低于轉(zhuǎn)基因擬南芥，丙二醛含量和電導(dǎo)率相對(duì)較高。
　　2、以地被菊‘紫妍’和‘紐9722’為試驗(yàn)材料，探究了外植體最佳脫毒時(shí)間、最適宜葉片分化和植株生根的培養(yǎng)基，建立了兩個(gè)品種高效再生體系，篩選出適宜進(jìn)行轉(zhuǎn)基因的地被菊品種。結(jié)果表明:最適宜‘紫妍’和‘紐9722’外植體消毒的時(shí)間分別是6min、8min;誘導(dǎo)‘紫妍’幼嫩葉片分化的最適培養(yǎng)基是MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1，

4、分化率接近93％，出芽數(shù)接近8.0;‘紐9722’的葉片分化率較低，最高值僅有50％，但莖段增殖系數(shù)在培養(yǎng)基MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1時(shí)達(dá)到了10.05;1/2MS培養(yǎng)基分別添加NAA0.2mg·L-1、0.3mg·L-1最有利于‘紫妍’和‘紐9722’生根，移栽后植株生長(zhǎng)狀況良好，成活率100％。
　　3、在‘紫妍’高效再生體系建立的基礎(chǔ)上，試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了抗生素敏感性的篩選。結(jié)果表明:卡那霉素6m