多拷貝木聚糖基因xyn-T的枯草芽胞桿菌整合表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá).pdf

1、我國(guó)作為一個(gè)養(yǎng)殖大國(guó)，飼料總產(chǎn)量位居世界第一。然而我國(guó)的特殊國(guó)情所致，其飼料資源相對(duì)匱乏，利用生物技術(shù)提高常規(guī)飼料的利用率，并且開(kāi)發(fā)一些非常規(guī)性飼料用于拓寬飼料資源，將是極為重要的。近年來(lái)，內(nèi)切木聚糖酶已多被廣泛應(yīng)用于飼料、制漿造紙和食品工業(yè)等，本研究基于木聚糖酶的重要價(jià)值和開(kāi)發(fā)前景的廣闊性，成功地轉(zhuǎn)化了多拷貝木聚糖酶基因的枯草芽孢桿菌WB800N表達(dá)宿主，采用固體發(fā)酵的形式，外分泌出了內(nèi)切木聚糖酶，并且對(duì)該酶進(jìn)行了初步的酶學(xué)性質(zhì)分析。

2、
　　整合載體pHT43/Spo0A是本試驗(yàn)需要構(gòu)建的目的載體，是以pHT43質(zhì)粒為基礎(chǔ)，以Spo0A基因作為單交換的同源片段，利用限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)Kpn I插入，得到整合載體pHT43/Spo0A。
　　研究發(fā)現(xiàn)，為了減少過(guò)載的外源高拷貝木聚糖酶基因?qū)λ拗鞯纳L(zhǎng)代謝的影響，人工將xynT基因內(nèi)的碳水化合物結(jié)合區(qū)敲除，經(jīng)過(guò)亞克隆，成功構(gòu)建單拷貝載體。利用Xho I與Sal I作為同尾酶的特性，成功構(gòu)建了一個(gè)包含三拷貝串聯(lián)表達(dá)