枯草芽孢桿菌麥芽糖啟動子P△glvA整合表達載體的構(gòu)建及啟動子功能的初步探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該課題主要工作是構(gòu)建帶有代謝物阻遏元素(catabolite repression element)突變(cre<'->)的枯草桿菌麥芽糖啟動子P△glvA,并以嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus stearothermophilus)的熱穩(wěn)定的β-半乳糖甙酶基因(bga)為報告基因,以整合載體PAX01為骨架的整合表達載體Pyzq-3;另外,為了初步探討枯草桿菌spoOA因子對麥芽糖啟動子的功能,從枯草桿菌(Bacillus subt

2、ilis)168的衍生菌株1094的基因組DNA中分別擴增孢子形成的早期因子基因spoOA的上、下游片段spoOA-front和spoOA-back,并以大腸桿菌(E.coli)質(zhì)粒pBluescriptⅡks(+)為骨架,以來自pBEST501質(zhì)粒上的新霉素(meo<'r>)抗性基因為枯草桿菌中的篩選標記,構(gòu)建了基于枯草桿菌spoOA基因位點的整合載體Pyzq-1.將線性化的Pyzq-3轉(zhuǎn)化宿主枯草桿菌IA785,得到突變株GJYY-

3、03.線性化的載體Pyzq-1轉(zhuǎn)化突變株GJYY-03,得到突變株GJYY-05.檢測突變株GJYY-03,GJYY-05在不同濃度誘導(dǎo)物(含0﹪,0.2﹪,0.5﹪,1﹪濃度的麥芽糖),培養(yǎng)基中含1﹪濃度的葡萄糖的情況下由P△glvA控制的β-半乳糖甙酶酶活.結(jié)果表明,啟動子P△glvA在0.5﹪濃度的麥芽糖誘導(dǎo)下表現(xiàn)出最大的活性;培養(yǎng)基中存在1﹪的葡萄糖,由啟動子P△glvA控制的β-半乳糖甙酶的活性受到抑制;spoOA基因產(chǎn)物的缺

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