表達(dá)PeaT1蛋白的枯草芽孢桿菌工程菌的構(gòu)建及其活性分析.pdf

1、PeaT1是來源于極細(xì)鏈格孢菌(Alternaria tenuissima)的一種蛋白激發(fā)子,研究表明其具有促進(jìn)植物生長和誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性的功能?？莶菅挎邨U菌本身無毒,對(duì)多種植物病原生物具有拮抗作用,是植物內(nèi)常見的內(nèi)生菌。本文利用PeaT1的誘導(dǎo)抗性和枯草芽孢桿菌的內(nèi)生定殖特性構(gòu)建了工程菌,檢測確認(rèn)了PeaT1蛋白在工程菌中的分泌表達(dá),此工程菌能夠在小麥、水稻和番茄植株體內(nèi)定殖,并具有提高植物抗逆性,促進(jìn)植物生長的活性。

2、　　 1.構(gòu)建了PeaT1蛋白-枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)載體。以枯草芽孢桿菌基因組DNA為模板,分別克隆和融合了組成型啟動(dòng)子P43和分泌效率較高的nprB基因信號(hào)肽編碼序列,利用SOE法與peaT1基因融合,構(gòu)建了大腸桿菌-枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)載體pHY43N-peaT1,通過酶切和測序驗(yàn)證了載體的正確性。
　　 2.實(shí)現(xiàn)了PeaT1蛋白在枯草芽孢桿菌中的分泌表達(dá)。通過電擊轉(zhuǎn)化法,將載體pHY43N-peaT1轉(zhuǎn)入枯草芽孢桿菌WB

3、800,PCR和RT-PCR分析表明,peaT1基因在枯草芽孢桿菌中進(jìn)行了正確的轉(zhuǎn)錄；SDS-PAGE和Western-blotting結(jié)果證明,在P43啟動(dòng)子的帶動(dòng)和nprB信號(hào)肽的引導(dǎo)下,peaT1基因在重組菌株中進(jìn)行了正確的分泌表達(dá)。
　　 3.證明了工程菌WB800-PeaT1能夠在植物體內(nèi)定殖。工程菌WB800-PeaT1的內(nèi)生定殖測定表明,在枯草芽孢桿菌WB800中轉(zhuǎn)入PeaT1后,對(duì)枯草芽孢桿菌在植物體內(nèi)的定殖沒有