Nrf2調(diào)控BRCA1轉(zhuǎn)錄的研究.pdf

1、目的:研究散發(fā)性乳腺癌中Nrf2調(diào)控BRCA1轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制。
　　方法:在乳腺癌HCC38、MD-MBA-231、MCF-7細(xì)胞中利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或siRNA干擾技術(shù)過表達(dá)或抑制Nrf2，然后通過熒光報(bào)告基因試驗(yàn)檢測(cè)BRCA1啟動(dòng)子活性，RT-PCR和Western Blot檢測(cè)BRCA1 mRNA和蛋白水平的表達(dá)，CHIP-reChIP檢測(cè)BRCA1啟動(dòng)子上Nrf2及其轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的結(jié)合狀態(tài)、組蛋白修飾狀態(tài)。在散發(fā)性乳腺癌組織中，通

2、過免疫組化檢測(cè)Nrf2和BRCA1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:報(bào)告基因分析表明Nrf2通過結(jié)合到BRCA1啟動(dòng)子的抗氧化反應(yīng)元件ARE而激活BRCA1啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，CBP和p300協(xié)同Nrf2參與BRCA1啟動(dòng)子的激活。在HCC38細(xì)胞中過表達(dá)Nrf2可以促進(jìn)Nrf2轉(zhuǎn)錄復(fù)合物結(jié)合于BRCA1啟動(dòng)子，還促進(jìn)BRCA1啟動(dòng)子上組蛋白H3和H4乙?；瑥亩T導(dǎo)BRCA1表達(dá)。在MCF-7細(xì)胞中利用siRNA下調(diào)Nrf2表達(dá)，可以抑制N

3、rf2轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的結(jié)合于BRCA1啟動(dòng)子以及組蛋白H3和H4乙?；?，從而抑制BRCA1表達(dá)。用H2O2處理細(xì)胞可以激活Nrf2，促進(jìn)Nrf2轉(zhuǎn)錄復(fù)合物結(jié)合到BRCA1啟動(dòng)子上，從而促進(jìn)BRCA1表達(dá)。在90例散發(fā)性乳腺癌病例中，免疫組化試驗(yàn)證實(shí)Nrf2與BRCA1的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:在散發(fā)性乳腺癌中，過表達(dá)的Nrf2與BRCA1啟動(dòng)子上Nrf2轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物的形成以及組蛋白的乙?；芮邢嚓P(guān)。機(jī)體內(nèi)Nrf2的表達(dá)或功能下降可