鵝細(xì)小病毒VP3基因與鵝γ干擾素基因在重組禽痘病毒中的共表達(dá).pdf

1、鵝細(xì)小病毒病(Goose Parvovirusis，GP)是由鵝細(xì)小病毒(Goose Parvovirus，GPV)引起雛鵝的急性、亞急性和敗血性傳染病，俗稱為小鵝瘟，呈世界性分布，發(fā)病率和死亡率極高，給養(yǎng)鵝業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，國內(nèi)外對GP的防治主要采取弱毒疫苗免疫母鵝的方式，而使雛鵝獲得免疫，雖然在該疫病的預(yù)防方面發(fā)揮著重要作用，但弱毒疫苗存在著散毒和毒力反強(qiáng)的現(xiàn)象，使其應(yīng)用受到了限制。因此，急需研制一種安全、有效的新型疫苗。

2、重組痘病毒疫苗以其安全、穩(wěn)定和能夠表達(dá)外源基因的優(yōu)點(diǎn)受到廣大研究者的關(guān)注，特別是重組禽痘病毒(Fowlpox virus，F(xiàn)PV)，含有復(fù)制非必需區(qū)，可以插入外源基因構(gòu)建多價聯(lián)苗，并能持續(xù)表達(dá)外源抗原，刺激機(jī)體持續(xù)產(chǎn)生特異抗體，而得到廣泛應(yīng)用。
　　GPV基因組主要編碼三種結(jié)構(gòu)蛋白，分別是VP1，VP2，VP3，其中VP3是病毒的主要衣殼蛋白，能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。γ干擾素(IFNγ)通過提高細(xì)胞免疫水平來增強(qiáng)機(jī)體的抗病毒能力，

3、大量研究表明其具有良好的免疫佐劑作用。因此，本研究為構(gòu)建共表達(dá)GPV-VP3基因和鵝INFγ基因的重組禽痘病毒，以先前構(gòu)建的pMD-18 T-GPV-IFNγ質(zhì)粒為模版，用帶EcoRⅠ酶切位點(diǎn)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到的目的基因進(jìn)行TA克隆，連接到pSY538載體啟動子下游，構(gòu)建pSY538-γ-LacZ，用NotⅠ切取目的基因和報告基因并插入到轉(zhuǎn)移載體pSY681中，獲得pSY681-LP2EP2-IFNγ-LacZ基因，最后通過Cl

4、on ExpressⅡ OneStep Cloning Kit將LP2EP2-VP3-LacZ基因克隆到pSY681-LP2EP2-IFNγ的NotⅠ酶切位點(diǎn)完成GPV-VP3基因和鵝IFNγ基因轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建(pSY-GoIFNγ-VP3)，采用脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染至禽痘病毒感染的雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)，經(jīng)藍(lán)斑法篩選重組病毒，并進(jìn)行8輪蝕斑純化，以及PCR鑒定和間接免疫熒光(IFA)分析。結(jié)果表明，所獲得的重組病毒rFPV-GoIFNγ