人白細胞介素22自分泌環(huán)路在肺癌發(fā)生中的作用及抗凋亡機制研究.pdf

1、IL-22是一種IL-10相關(guān)的細胞因子，其功能性受體包括兩條鏈：IL-22R1和IL-10R2。IL-10R2鏈普遍表達于許多器官和組織中，其中包括免疫細胞、肺臟、肝臟和結(jié)腸等。IL-22通過和其受體結(jié)合可以導致快速的STAT磷酸化或AKT的活化，從而促進肝細胞的存活和增殖。在支氣管肺泡灌洗液中分離出的肺泡巨噬細胞和肺泡上皮細胞都可以檢測到IL-22的表達。肺結(jié)節(jié)病人和急性呼吸窘迫癥患者的IL-22表達要低于正常對照組。盡管這些現(xiàn)象提

2、示著IL-22在肺部炎性反應中發(fā)揮重要作用，但IL-22在肺部腫瘤中的作用尚未明確。 肺癌是第三大常見的惡性腫瘤，有75％診斷為肺癌的患者屬于非小細胞肺癌，其預后一般很差。雖然手術(shù)切除、放射治療以及化學藥物治療仍然是這一惡性腫瘤的基本治療方案，但非小細胞肺癌對化療藥物的敏感性是很低的，故抗腫瘤藥物的治療效果差。最主要的原因是非小細胞肺癌(NSCLC)本身存在化療藥物抵抗性，其主要機制是干擾細胞正常的凋亡途徑，促進腫瘤細胞存活。

3、 本研究的目的在于探討IL-22與NSCLC的關(guān)系；闡述NSCLC在疾病進展和藥物抵抗中的抗凋亡效應以及IL-22在抗凋亡效應中所發(fā)揮的作用。首先我們對手術(shù)切除的NSCLC標本以及正常肺組織標本進行免疫組化分析；對Ⅰ～Ⅲ期NSCLC患者的外周血、Ⅳ期NSCLC患者的胸腔積液進行ELISA檢測。我們發(fā)現(xiàn)IL-22在NSCLC患者的原發(fā)癌組織、血清以及惡性胸腔積液中的表達均顯著高于對照。IL-22受體的mRNA在肺癌組織以及NSCLC

4、細胞系中都有表達。接下來，我們構(gòu)建pcDNA3/IL-22表達載體，轉(zhuǎn)染兩種NSCLC細胞株，建立穩(wěn)定表達IL-22的NSCLC細胞系。通過．Annexin V/PI雙染實驗、Caspase活性檢測和DNA片段分析來觀察IL-22轉(zhuǎn)染細胞和對照細胞在無血清饑餓培養(yǎng)或化療藥物誘導下細胞凋亡的情況。數(shù)據(jù)顯示，IL-22的表達可以活化STAT3信號傳導通路，誘導其下游的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表達，保護NSCLC細胞抵抗無血清饑餓

5、誘導的凋亡和化療藥物誘導的凋亡。用IL-22R1的阻斷抗體阻止IL-22的信號傳遞可以使這一保護作用消失，促使腫瘤細胞凋亡。最后，我們選擇針對IL-22mRNA的靶序列構(gòu)建pU6+27/IL-22shRNA表達載體，希望通過RNA干擾來沉默IL-22基因的表達，進一步證實IL-22在細胞凋亡中的作用。實驗結(jié)果表明，IL-22基因沉默可以導致細胞對化療藥物敏感，細胞凋亡增加。注射IL-22干擾質(zhì)粒可以抑制人NSCLC細胞在裸鼠體內(nèi)的生長。

6、綜上所述，IL-22在NSCLC患者的原發(fā)腫瘤組織、血清和胸腔積液中異常表達，且IL-22的受體mRNA也在NSCLC細胞系和腫瘤組織中表達，由此判斷IL-22在NSCLC中可以形成自分泌環(huán)路發(fā)揮作用。IL-22的基因轉(zhuǎn)染可以抑制腫瘤細胞的凋亡，IL-22基因沉默或阻斷IL-22R1可以逆轉(zhuǎn)IL-22的抑制作用。體內(nèi)實驗也證實，干擾腫瘤細胞內(nèi)IL-22的表達可以抑制腫瘤在裸鼠體內(nèi)的生長。我們的研究表明，在NSCLC中可能通過IL-22自