白細(xì)胞介素8、巨噬細(xì)胞在燒傷炎癥損害中作用的研究.pdf

1、燒傷病人的死亡原因，特別是大面積嚴(yán)重?zé)齻?，較為復(fù)雜。在燒傷整個(gè)過程中，有很多有害物質(zhì)從燒傷創(chuàng)面壞死組織及其后的炎癥反應(yīng)中源源不斷的產(chǎn)生，導(dǎo)致機(jī)體防御能力降低，很容易發(fā)生感染和內(nèi)臟功能衰竭，導(dǎo)致病人的死亡。燒傷失控性炎癥反應(yīng)俗稱介質(zhì)病，傷后血中大量的促炎性細(xì)胞因子，既是失控性炎癥反應(yīng)的依據(jù)，又是傷后炎癥級聯(lián)反應(yīng)過程的產(chǎn)物，是細(xì)胞組織損害的原因之一。因此，為提高大面積嚴(yán)重?zé)齻闹斡?，早期?chuàng)面釋放的細(xì)胞因子是研究的重點(diǎn)。 IL-8是

2、一種多源性的細(xì)胞因子，可來自單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞、T細(xì)胞及骨肉瘤細(xì)胞等，其中以單核細(xì)胞產(chǎn)量最為豐富。燒傷后，尤其是大面積燒傷病人，創(chuàng)面水皰、創(chuàng)面分泌物及血液中IL-8均是增高的，IL-8mRNA轉(zhuǎn)錄水平也是明顯增強(qiáng)。高濃度IL-8在創(chuàng)面局部可以增加中性粒細(xì)胞浸潤，擴(kuò)大壞死創(chuàng)面，使殘余皮膚附件消失，抑制創(chuàng)面修復(fù)，在全身會(huì)導(dǎo)致燒傷后一系列炎性反應(yīng)，且它的持續(xù)升高往往與嚴(yán)重的MODS、膿毒血癥有很強(qiáng)的聯(lián)系。 巨噬細(xì)胞是個(gè)

3、很獨(dú)特的細(xì)胞，它可以被激活后成為具有吞噬功能的炎癥效應(yīng)細(xì)胞，同時(shí)它也是一類重要的分泌細(xì)胞，被激活后可以釋放補(bǔ)體、凝血因子，活性酶、激素以及我們所關(guān)心的細(xì)胞因子如IL-1、IL-3、IL-6、IL-8、TNF、IFN、FCF等。體外(壞死組織→IL-8等趨化因子→Mφ→IL-1、IL-6、TNF→SIRS)這一炎癥級聯(lián)放大信號途徑已證實(shí)存在。因此該信號途徑可能與燒傷炎性損害的發(fā)生、發(fā)展有重要關(guān)系。很少報(bào)道說明在體實(shí)驗(yàn)眾多炎癥因子、白細(xì)胞介

4、素-8和局部浸潤巨噬細(xì)胞的關(guān)系，而體外實(shí)驗(yàn)與在體實(shí)驗(yàn)時(shí)細(xì)胞的功能可以有差異，因此本研究將在體這一信號途徑作為研究內(nèi)容。 本實(shí)驗(yàn)旨在觀察燒傷早期IL-8、MΦ在燒傷炎癥損害中的變化規(guī)律，明確它們在參與燒傷后炎癥損害的中心作用；通過巨噬細(xì)胞耗竭實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步觀察巨噬細(xì)胞的作用；由于紅細(xì)胞膜上有大量的IL-8受體DARC，觀察它對燒傷后血漿IL-8濃度的影響。 材料與方法： 采用大鼠10％TBSAⅢ°燙傷和clodron

5、ate-liposomes巨噬細(xì)胞耗竭模型，隨機(jī)分為假燙組、燙傷組(各組每時(shí)相點(diǎn)n=6)和耗竭組。檢測了大鼠血漿、創(chuàng)面中IL-8、TNF-α濃度；白細(xì)胞計(jì)數(shù)、單核細(xì)胞比例、免疫組織化學(xué)染色觀察皮下巨噬細(xì)胞浸潤和紅細(xì)胞結(jié)合IL-8濃度。 主要結(jié)果： 1.大鼠10％Ⅲ°體表燙傷后白細(xì)胞計(jì)數(shù)是逐漸增高的，在傷后6小時(shí)達(dá)到高峰，但均是在正常范圍內(nèi)波動(dòng)；血液中細(xì)胞比例發(fā)生改變，燒傷后2小時(shí)單核細(xì)胞增加明顯，6小時(shí)后粒細(xì)胞增高，而2

6、4小時(shí)后淋巴細(xì)胞增高；存在著時(shí)序性的不同種類白細(xì)胞的輪次變化，單核/巨噬細(xì)胞→粒細(xì)胞→淋巴細(xì)胞。創(chuàng)面和血漿IL-8和TNF-α燒傷后48小時(shí)內(nèi)均顯著高于假傷對照組，血漿IL-8在燒傷后2小時(shí)達(dá)到高峰(133.96pg/ml)，血漿TNF-α燒傷后12小時(shí)達(dá)到高峰(102.79pg/ml)。創(chuàng)面皮下組織IL-8在燒傷后2小時(shí)就顯著增高為191.08pg/ml，12小時(shí)達(dá)到高峰(285.5lpg/ml)；創(chuàng)面皮下組織TNF-α燒傷后6小時(shí)才

7、顯著增高為189.20pg/ml，12小時(shí)達(dá)到高峰(224.53pg/ml)。24小時(shí)后才可見皮下組織中明顯的巨噬細(xì)胞浸潤。 2.大鼠10％Ⅲ°體表燙傷創(chuàng)面皮下組織和血漿中IL-8峰值時(shí)間都是傷后2小時(shí)，然而IL-8創(chuàng)面皮下組織中的濃度與血漿中濃度不相關(guān)。。創(chuàng)面TNF-α的峰值時(shí)間與血漿中TNF-α的峰值時(shí)間卻不一致(2小時(shí)，12小時(shí))。 3.燒傷2小時(shí)血漿IL-8在單核/巨噬細(xì)胞耗竭組(131.51pg/ml)與燒傷對

8、照(133.96pg/ml)間無顯著差異，TNF-α在單核/巨噬細(xì)胞耗竭組(64.89pg/ml)與燒傷對照(66.51pg/ml)間也無顯著差異，創(chuàng)面皮下組織中IL-8在單核/巨噬細(xì)胞耗竭組(175.827pg/ml)與燒傷對照(191.08pg/ml)間無顯著差異。 4.燒傷6和24小時(shí)單核/巨噬細(xì)胞耗竭組血漿IL-8(94.07pg/ml、74.89pg/ml)較燒傷對照(121.54pg/ml、113.69pg/ml)顯

9、著降低，降幅達(dá)分別為23％、34％，燒傷24小時(shí)巨噬細(xì)胞clodronate-liposomes耗竭后血漿TNF-α下降明顯，自85.73pg/ml降至70.26pg/ml，降幅達(dá)18％。 5.燒傷24小時(shí)內(nèi)紅細(xì)胞IL-8逐漸下降，到6h達(dá)到最低(134.59pg/3.0×109)，與正常對照組(232.98pg/3.0×109)相比較均差異顯著，24小時(shí)后逐漸上升，48h達(dá)到最高(265.46pg/3.0×109)，甚至超過正

10、常(232.98pg/3.0×109)。 主要結(jié)論： 1.大鼠10％Ⅲ°體表燙傷可引起局部和全身性炎癥反應(yīng)變化。 2.大鼠10％Ⅲ°體表燙傷局部炎癥介質(zhì)白細(xì)胞介素-8、腫瘤壞死因子-α的增高可能不是血漿白細(xì)胞介素-8、腫瘤壞死因子-α升高的主要原因。 3.燒傷2小時(shí)單核/巨噬細(xì)胞可能不是血漿和創(chuàng)面皮下組織中的IL-8和腫瘤壞死因子-α的重要來源，燒傷后局部和全身性炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)中IL-8、單核/巨噬細(xì)胞可