白細(xì)胞介素-6在Barrett食管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的:
　　IL-6是一種多效能的促炎癥細(xì)胞因子，主要參與調(diào)節(jié)免疫防御反應(yīng)，組織損傷或炎癥可刺激IL-6的釋放。近年來研究發(fā)現(xiàn)，IL-6在腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，IL-6在不同腫瘤中均被檢測(cè)到過表達(dá)，如卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、腎癌和肺癌等[1，2，3，4，5]; IL-6通過產(chǎn)生EMT促進(jìn)乳腺和前列腺腫瘤生長和轉(zhuǎn)移;IL-6在結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤早期形成中起到重要作用。研究表明Barrett食管及食管腺癌的病人的血清及食

2、管組織IL-6的水平較正常對(duì)照組高[6]。另有報(bào)道提示IL-6對(duì)Barrett食管具有促腫瘤作用，然而IL-6在Barrett食管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變及癌變過程中的作用和機(jī)制尚不清楚。本研究擬通過運(yùn)用不同濃度的IL-6刺激Barrett食管細(xì)胞，觀察其形態(tài)、EMT相關(guān)分子、轉(zhuǎn)移及侵襲能力等變化，探討IL-6在癌前病變細(xì)胞發(fā)生癌變過程中所起的作用及其信號(hào)通路。應(yīng)用高脂飲食飼養(yǎng)大鼠制作非酒精性脂肪肝模型，測(cè)定大鼠血清和食管組織細(xì)胞因子IL-6的水平

3、，觀察大鼠食管變化，評(píng)估大鼠食管粘膜病變，探討IL-6與食管炎及癌前病變的相關(guān)性。
　　材料和方法:
　　(1)、體外，應(yīng)用0、10、20、50、100 ng/mL不同濃度梯度IL-6刺激CP-D細(xì)胞，采用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，Western blot、RT-PCR和免疫熒光檢測(cè)CP-D細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin表達(dá)情況，劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CP-D細(xì)胞的

4、侵襲和遷移能力變化。
　　(2)、IL-6刺激CP-D細(xì)胞后，檢測(cè)PI3K/AKT、MAPK/ERK信號(hào)通路以及E-cadherin、Vimentin表達(dá)量的改變，并使用PI3K抑制劑LY294002和ERK1/2抑制劑U0126，探討IL-6刺激EMT發(fā)生的可能機(jī)制。進(jìn)一步揭示其分子機(jī)制，為Barrett食管癌變的防治提供新思路和新靶點(diǎn)。
　　(3)、40只雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，分別用普通飼料和高脂飼料飼養(yǎng)15周

5、，于第0，3，6，9，12，15周測(cè)量體重及體長，并于15周時(shí)測(cè)定肝功能指標(biāo)、血脂指標(biāo)和炎癥因子指標(biāo)白介素1(IL-1)，白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-α);取大鼠肝臟及食管，記錄肝、食管大體形態(tài)并進(jìn)行HE染色，計(jì)數(shù)食管粘膜下浸潤的炎性細(xì)胞，Western blot檢測(cè)食管組織IL-6蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)、不同濃度梯度IL-6刺激CP-D24小時(shí)后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，細(xì)胞間的粘附連接減少。CP-

6、D細(xì)胞上皮標(biāo)志物E-cadherin分子的mRNA和蛋白水平表達(dá)降低、間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin分子的mRNA和蛋白水平表達(dá)增加，且50ng/mL為IL-6刺激致CP-D細(xì)胞發(fā)生EMT的最適濃度。劃痕實(shí)驗(yàn)以及transwell實(shí)驗(yàn)均證明IL-6刺激可致CP-D細(xì)胞遷移和侵襲能力增強(qiáng)。
　　(2)、IL-6刺激CP-D細(xì)胞后，AKT磷酸化的表達(dá)量隨著IL-6刺激時(shí)間的增長而增加。ERK1/2磷酸化的表達(dá)量也有與AKT一樣的趨勢(shì)。分別

7、用ERK1/2，AKT信號(hào)通路抑制劑10μmol/L LY294002和U0126預(yù)處理CP-D細(xì)胞，然后再使用50 ng/mL IL-6刺激CP-D細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在IL-6和抑制劑一起作用于CP-D細(xì)胞的情況下，AKT和ERK信號(hào)通路被明顯抑制。LY294002和U0126預(yù)處理CP-D細(xì)胞，在加用IL-6刺激后，Western Blot結(jié)果表明EMT相關(guān)指標(biāo)E-cadherin表達(dá)水平升高、Vimentin表達(dá)水平降低，表明信號(hào)通路抑制

8、劑可有效阻止CP-D在IL-6刺激下發(fā)生EMT改變。Transwell實(shí)驗(yàn)顯示:加用信號(hào)通路抑制劑后，CP-D細(xì)胞的遷移能力下降。
　　(3)、高脂飲食導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)組增重明顯快于對(duì)照組;第15周時(shí)實(shí)驗(yàn)組發(fā)生脂肪肝，血脂和炎癥因子指標(biāo)IL-1、IL-6、TNF-α均高于對(duì)照組，但兩組肝功能指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;實(shí)驗(yàn)組食管無明顯變化，HE染色見炎癥細(xì)胞浸潤，食管組織IL-6蛋白半定量檢測(cè)明顯高于對(duì)照組。
　　結(jié)論：
　　(1)、I