白細胞介素-23受體在克羅恩病中的表達及作用機制研究.pdf

1、克羅恩病(Crohn's Disease，CD)作為是一種腸道非特異性炎性肉芽腫性疾病，其發(fā)病機制與Th17細胞的細胞免疫有關。同時在Th17細胞的分化過程中，IL-23/IL-17信號通路起到關鍵作用。而IL-23R的具體作用，目前不詳。
　　本研究檢測CD和正常人在腸道黏膜中的IL-23R和IL-17A的表達。同時在體外應用磁珠分選人外周血的CD4+T細胞，并由細胞因子誘導分化成Th17細胞。同時應用外源性加入抗人IL-23R

2、單克隆抗體，觀察其對Th17細胞的分化影響。
　　第一部分白細胞介素23受體、白細胞介素17A在克羅恩病中的表達及臨床意義
　　目的:通過檢測白細胞介素23受體(IL-23R)及白細胞介素17A(IL-17A)在克羅恩病(CD)患者腸黏膜中的表達水平，探討其在CD發(fā)病過程中的作用及意義。方法:收集32例克羅恩病(CD)患者及27例對照者的內鏡腸黏膜活檢標本，采用熒光定量PCR技術檢測腸黏膜內IL-23R、IL-17A mRN

3、A的表達情況，免疫組化技術分析IL-23R、IL-17A在腸黏膜中的原位表達。結果:與健康對照組相比，CD患者腸黏膜組織內IL-23R mRNA表達顯著增高（P＜0.05)。CD患者腸黏膜組織內IL-17A mRNA表達顯著增高(P＜0.05)。免疫組化分析顯示IL-23R陽性細胞在CD在腸黏膜固有層內有較多表達，較正常黏膜內的腸上皮細胞相比，CD患者腸黏膜IL-23R蛋白表達量最著增高（P＜0.05)。IL-17A陽性細胞在CD腸黏膜

4、固有層內有較多表達，較正常黏膜內的腸上皮細胞相比，CD患者腸黏膜IL-17A蛋白表達量最著增高（P＜0.05)。結論:IL-23R及IL-17A在CD患者腸黏膜中表達顯著增高，提示IL-23R及IL-17A表達異常與CD的發(fā)生發(fā)展密切相關，有可能成為CD治療的新靶點。
　　第二部分 IL-23R抗體對外周血CD4+T細胞分化的影響
　　目的:觀察抗人IL-23R單克隆抗體對于CD4+T細胞分化為Th17細胞的過程的影響。方法

5、:收集人外周血細胞，應用磁珠分選出CD4+T細胞，并應用TNF-β1和IL-6誘導分化成Th17細胞，在應用IL-23R單克隆抗體干預Th17細胞的分化過程。應用熒光定量PCR和Western-Blot檢測IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達。結果:應用磁珠分選可以提取CD4+T細胞，同時應用細胞因子(TNF-β1和IL-6)誘導分化成Th17細胞，同時IL-23R、ROR-γ和IL-17A的表達明顯增高。在Th17細胞的分化過