以CLA-1為靶標的微生物來源抗動脈粥樣硬化活性化合物的分離純化、結構鑒定及分子機制研究.pdf

1、心血管疾病在發(fā)達國家和大多數(shù)發(fā)展中國家是危害人類健康的主要殺手，而動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是多種嚴重心血管疾病的病理基礎。目前臨床上廣泛應用的他汀類藥物可以降低20％～40％的心血管事件。要進一步降低心血管疾病的危害，在降低低密度脂蛋白膽固醇的同時必須從預防和逆轉動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的新的治療靶點出發(fā)來尋找具有新型作用機制的藥物。近十幾年的來研究表明，高密度脂蛋白(high d

2、ensity lipoprotein，HDL)的抗AS作用主要基于HDL參與的膽固醇逆轉運(reverse cholesterol transport，RCT)過程，并確定清道夫受體BI(scavenger receptor class B typeⅠ，SR-BI)為功能性的HDL受體，人的高密度脂蛋白受體亦被稱作CLA-1。SR-BI/CLA-1在RCT過程中起著關鍵作用，被認為是發(fā)現(xiàn)新型心血管藥物潛在的新靶標。RCT的增強將有利于A

3、S病灶積蓄的膽固醇減少和病變的逆轉，因此可以通過升高SR-BI/CLA-1表達水平來加速RCT，促進機體富余膽固醇酯的清除;能升高SR-BI/CLA-1基因表達的化合物有可能成為有效治療動脈粥樣硬化性心血管疾病新型藥物的先導物。
　　 為了尋找能夠提高CLA-1表達水平的活性化合物，本工作選擇一株陽性菌株鏈霉菌04-9179（鑒定為Streptomyces hygroscopicus），對其發(fā)酵液的活性成分進行了分離純化，利用大

4、孔樹脂HP-20柱層析、ODS柱層析和HPLC制各柱層析等色譜方法分離得到的四個純化合物9179B、9179D、9179E和9179F，利用ESI-MS、FAB-MS、1H-NMR、13C-NMR和二維NMR等波譜解析方法對四個化合物進行了結構鑒定，確證9179B為(S，2E，4E)-7-（4-（二甲氨基）苯基)-4，6二甲基-7-氧代庚基-2，4-烯酰胺(FL657C)，9179D為(2E，4E，6S)-7-（4-（二甲氨基）苯基)-

5、4，6-二甲基-7-氧代-N-((2R,3R,5S，6R)-3，4，5-三羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-氧基）庚基-2，4-烯酰胺(Trichostatin D)，9179E為(S，2E，4E)-7-（4-（二甲氨基）苯基）-N，4，6-三甲基-7-氧代庚基-2，4-烯酰胺(TrichostatinRK)，9179F為4，7-二羥基異黃酮（大豆苷元）。9179B、9179D和9179E均能在篩選模型中以微摩爾濃度上調CLA-

6、1基因的轉錄活性，其活性活性作用在HepG2細胞利用RT-PCR和Western Blotting在CLA-1轉錄和翻譯水平上得到了證實。此外，通過對PPARγ的轉錄激活活性和對CLA-1基因上游啟動子區(qū)不同反應元件的影響的研究，初步確定了三個活性化合物的可能作用位點。9179B、9179D和9179E能夠增加RAW264.7細胞對DiI-HDL的攝取。另外，9179B也能在微摩爾濃度下上調ABCA1基因的轉錄活性及上調HepG2細胞中