姜黃素抗動脈粥樣硬化的分子機制.pdf

1、目的本課題通過提純大鼠肝微粒體中β-羥基-β-甲基戊二酸輔酶A還原酶(HMG-CoAreductase)，氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HCAECs)和建立高脂飲食兔動脈粥樣硬化模型。應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)探討姜黃素(curcumin)在體外對純化的β-羥基-β-甲基戊二酸輔酶A還原酶作用，對氧化低密度脂蛋白的誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HCAECs)和兔動脈硬化模型主動脈上表達的植物血凝素樣受體(Lox-1)抑

2、制作用機制，探究其作用環(huán)節(jié)(藥物靶點)，為姜黃素的進一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。方法制備兩種大鼠肝的微粒體—凍融提取—硫酸銨沉淀—熱處理—硫酸銨沉淀—生物性凝膠柱層析—CoA親和層析柱層析制備了純化了的HMG-CoAreductase，通過紫外分光光度法測定酶活性，以普伐他丁為陽性藥物對照，利用米氏方程(Michaelis-Menten)的雙倒數(shù)作圖法(Lineweaver-Burk)建立測定酶競爭性抑制劑的方法。建立氧化型低密度脂蛋白(ox

3、-LDL)處理的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HCAECs)模型，以氯沙坦為陽性藥物對照，利用RT-PCR法，測定不同濃度姜黃素對模型的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上Lox-1表達的影響，分析起作用靶點和作用方式，并比較了姜黃素對正常和高脂飲食建立兔動脈粥樣硬化模型的體重、血液生化指標(biāo)、主動脈硬化斑塊、Lox-1mRNA表達的影響。結(jié)果姜黃素對β-羥基-β-甲基戊二酸輔酶A還原酶無影響，姜黃素在傳代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)實驗中可有效抑制氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)引起的