姜黃素誘導(dǎo)HO-1表達(dá)抗大鼠動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究.pdf

1、目的：探討長(zhǎng)期應(yīng)用姜黃素（Curcumin，CMN）能否誘導(dǎo)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（Vascular Smooth Muscle Cell，VSMC）安全、持久地表達(dá)血紅素氧合酶-l（Heme Oxygenase-1，HO-1），以及誘導(dǎo)HO-1表達(dá)能否有效發(fā)揮內(nèi)源性抗動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）作用。 方法：以3月齡雄性Wistar大鼠46只為研究對(duì)象，隨機(jī)分為CMN組（A組）、鋅原卟啉（Zinc pro

2、toporphyrinⅨ，ZnPPⅨ）組（B組）、CMN+ ZnPPⅨ組（C組）、高脂飼料組（D組）及普通對(duì)照組（E組）共5組，D組大鼠14只，余每組各8只，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為14周。步驟分為：1．建立AS模型。除E組給予普通飼料喂養(yǎng)外，其余四組均同法復(fù)制AS模型，具體方法是：給予大鼠高脂飼料喂養(yǎng)并于最初時(shí)一次性給予腹腔注射維生素D注射液70萬(wàn)U/kg。于6周末、10周末及14周末分別隨機(jī)選取D組大鼠2只處死，取降主動(dòng)脈起始段1-2厘米送病檢，

3、追蹤了解AS形成狀況。2．藥物干預(yù)對(duì)HO-1蛋白表達(dá)及HO-1活力的影響。于建立AS模型初始即予A組CMN3mg/kg隔日腹腔注射一次；B組ZnPPⅨ7．5mg/kg、隔日腹腔注射一次；C組按A、B組方法同時(shí)給予CMN及ZnPPⅨ，14周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束。處死大鼠，取降主動(dòng)脈一部份行免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）檢查，了解細(xì)胞內(nèi)HO-1表達(dá)及分布情況，在200倍光鏡下見(jiàn)細(xì)胞胞漿內(nèi)有棕褐色顆粒樣產(chǎn)物的即為HO-

4、1蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞，對(duì)每張切片隨機(jī)測(cè)定5個(gè)不重復(fù)視野的光密度（Optical Density，OD）值，取平均值代表HO-1蛋白表達(dá)量；另一部份主動(dòng)脈組織用作勻漿測(cè)定HO-1活力，即根據(jù)HO-1降解血紅素生成膽紅素的原理，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)體系中膽紅素的生成量代表HO-1活力。比較不同組間HO-1蛋白表達(dá)量及HO-1活力差異。3．誘導(dǎo)及抑制HO-1表達(dá)對(duì)AS的影響及相關(guān)機(jī)制研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，分別取各組大鼠降主動(dòng)脈起始段部分，剝除外膜結(jié)締組織置

5、入10%中性緩沖甲醛液中固定，常規(guī)石蠟切片及蘇木素伊紅（Hematoxylinand Eosin，HE）染色，光鏡下觀察平滑肌細(xì)胞、泡沫細(xì)胞及內(nèi)膜、中膜變化。于多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)測(cè)量?jī)?nèi)膜、中膜厚度及其比值。比較不同干預(yù)措施對(duì)AS的影響。4．同時(shí)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死大鼠時(shí)，經(jīng)心臟取血行各組肝腎功、血脂、C-反應(yīng)蛋白（C-Reactive Protein，CRP）、白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、丙二醛（Malon

6、dialdehyde，MDA）、氧化低密度脂蛋白（oxidized Low Density Lipoprotein，ox-LDL）等指標(biāo)檢測(cè)，比較不同處理方法下各項(xiàng)指標(biāo)的變化情況。另外對(duì)A、E組大鼠腎臟行病理切片檢查，結(jié)合腎功評(píng)價(jià)CMN的安全性。 結(jié)果：1．大鼠AS模型成功建立，與E組比較，14周末時(shí)病理切片見(jiàn)D組主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，向管腔突出，內(nèi)膜下可見(jiàn)大量泡沫細(xì)胞聚集；中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂、極性消失，內(nèi)膜與中膜厚度比例明顯

7、增加（P<0．05）。2．與B、C、D組相比，A組HO-1蛋白表達(dá)量明顯增加，HO-1活力顯著升高，AS程度則顯著減輕，B組HO-1蛋白表達(dá)明顯降低，HO-1活力尤其低下，其AS程度則在各組中最明顯。C組HO-1蛋白表達(dá)及活力與B組相似（P>0．05），其AS程度較B組稍輕而與D組相似（P>0．05）。3．各組間血脂、肝功、CRP、IL-6、MDA及ox-LDL均差別顯著，其中應(yīng)用ZnPPⅨ的B、C兩組各指標(biāo)顯著高于D組（均為P<0．0

8、5）：而應(yīng)用CMN的A組以上指標(biāo)則明顯低于D組（均為P<0．05）。4．A組大鼠腎功較E組未見(jiàn)明顯差別（P>0．05），其腎臟病理切片亦未見(jiàn)明顯異常。 結(jié)論：1．高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合腹腔注射維生素D可復(fù)制大鼠AS模型。2．CMN能顯著誘導(dǎo)大鼠VSMC表達(dá)HO-1蛋白并增加HO-1活力：但這種誘導(dǎo)作用可被ZnPPⅨ阻斷。3．誘導(dǎo)HO-1表達(dá)可能是CMN抗AS的主要機(jī)制。4．CMN抗AS作用除誘導(dǎo)HO-1外可能還存在其他機(jī)制。5．長(zhǎng)期應(yīng)