銅綠假單胞菌外膜耐藥和保護原功能蛋白組學的研究.pdf

1、銅綠假單胞菌是人類的機會致病茵，極少感染健康個體，但對免疫缺陷者，如燒傷、艾滋病、癌癥或囊性纖維化等患者則有較高的感染率。銅綠假單胞菌具有內(nèi)在的耐藥性，該菌的耐藥機制以及相關疫苗的開發(fā)一直以來都備受研究人員的重視。 本文運用蛋白質(zhì)組學特別是免疫蛋白質(zhì)組學的方法對銅綠假單胞菌的外膜蛋白進行了研究，對其進行分離和鑒定，在此基礎上分析了耐藥株外膜蛋白的表達變化以及銅綠假單胞菌外膜免疫原性蛋白。 首先，我們用月桂酰肌氨酸鈉的方法

2、提取了銅綠假單胞菌的外膜蛋白，對其進行了2-DE，并通過質(zhì)譜分析鑒定了其中26個外膜蛋白，構建了銅綠假單胞菌外膜蛋白的分子表達圖譜，為下一步的研究奠定了基礎。 然后，通過藥物選擇獲得銅綠假單胞菌5種不同藥物的耐藥株，進而對耐藥株的外膜蛋白質(zhì)組進行系統(tǒng)比較，共鑒定出8種耐藥相關外膜蛋白質(zhì)，包括紅霉素耐藥株1種，氯霉素和巴洛沙星耐藥株各有2種，頭胞曲松鈉耐藥株有4種，氨芐青霉素耐藥株有5種。在這8種變化的蛋白質(zhì)中，OprD為銅綠假單

3、胞菌對氯霉素、氨芐青霉素、頭胞曲松鈉及巴洛沙星共同變化的蛋白質(zhì)，OprF、OmpH1、MexA是銅綠假胞菌對氨芐青霉素和頭胞曲松鈉共同變化的蛋白質(zhì)。這種耐藥性研究的方法和規(guī)模在國內(nèi)外尚未見報道。 最后，我們應用免疫蛋白質(zhì)組學的方法，即雙向電泳與Western blot相結合，繼之于MALDI-TOF-MS分析的方法，發(fā)現(xiàn)了銅綠假單胞菌外膜蛋白中的8個免疫原性蛋白質(zhì)。在對這8個蛋白進行克隆表達及純化后，進行小鼠免疫和攻毒實驗，發(fā)現(xiàn)