銅綠假單胞菌生物膜形成相關的蛋白質組學研究.pdf

1、目的：找出銅綠假單胞菌野生型PA01與黏液型PD0300菌株、PA01lasI rhlI基因缺陷型菌株、PA01 lasR rhlR基因缺陷型菌株之間的差異蛋白質，探討這些蛋白質與銅綠假單胞菌生物膜形成的關系。 方法： (1)將同一份樣品配制成不同蛋白濃度的標本分別上樣檢測，對檢測所得蛋白質圖譜進行分析。(2)根據最佳檢測蛋白濃度，將黏液型PD0300、野生型PA01、PA01 lasIrhlI基因缺陷型和PA01 lasR r

2、hlR基因缺陷型菌株的菌體蛋白分別采用CM10、IMAC3-Cu這兩種蛋白質芯片，運用SELDI技術進行測定，篩選最佳蛋白質芯片。(3)利用SELDI技術對黏液型PD0300、野生型PA01、PA01 lasIrhlI基因缺陷型和PA01 lasR rhlR基因缺陷型菌株的菌體蛋白分別進行檢測，并采用Biomarker Wizard軟件進行分析。 結果：(1)檢測蛋白濃度為1.5gg/μl時，進行SELDI檢測可發(fā)現(xiàn)較多的蛋白峰

3、。(2)同樣檢測蛋白濃度時，CM10芯片捕獲的蛋白峰數量比IMAC3-Cu芯片多。(3)銅綠假單胞菌野生型PA01與黏液型PD0300菌株的菌體蛋白比較，有16個蛋白峰存在差異(P<0.01)。與野生型PA01菌株相比，PD0300菌株中有10個蛋白質高表達，分子量分別為4，074Da、3，817Da、8，923Da、8，148Da、3，332Da、4，521Da、7，621Da、11，594Da、7，83iDa和13，75IDa；有6

4、個蛋白質低表達，分子量分別為6，199Da、6，899Da、12，379Da、6，11 5Da、6，763Da和8，576Da。(4)銅綠假單胞菌PA01 lasI rhlI基因缺陷型與野生型PA01菌株相比有1個蛋白質低表達(P<0.05)，分子量為6，910Da。(5)銅綠假單胞菌PA01 lasR rhlR基因缺陷型與野生型PA01菌株之間有4個蛋白峰存在差異(P<0.05)。在PA01 lasR rhlR基因缺陷型菌株中有2個蛋

5、白質高表達，分子量分別為8,924Da和8,790Da；有2個蛋白質低表達，分子量分別為6,735Da和6,986Da。 結論： (1)運用SELDI技術對細菌菌體蛋白進行分析的最佳檢測蛋白濃度為1.5μg／μl。 (2)與IMAC3-Cu芯片相比，CM10芯片更適于細菌菌體蛋白質組學的研究。 (3)銅綠假單胞菌野生型PA01與黏液型PD0300的菌體蛋白有16個蛋白質表達明顯不同，這些差異蛋白可能與銅綠