瘦素對體外脂變HL-02細胞內(nèi)甘油三酯含量的影響.pdf

1、目的：觀察瘦素對體外脂質(zhì)變性人肝L-02細胞甘油三酯含量以及OB-Rb（瘦素受體）、STAT3(信號轉導和轉錄激活子蛋白3)、MTP(微粒體甘油三酯轉移蛋白) mRNA表達的影響，以推斷瘦素、瘦素受體及其后信號通路，與非酒精性脂肪肝之間的可能關系，以探討瘦素調(diào)節(jié)脂變肝細胞內(nèi)脂質(zhì)代謝的作用機制，為今后進一步研究提供理論依據(jù)。 方法：采用隨機對照研究，以離體人肝L-02細胞為研究對象。用10％（V/V）醫(yī)用脂肪乳注射液和10％（V/

2、V）胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基孵育人肝L-02細胞24小時，制備肝細胞脂肪變性模型。后分別加入重組人瘦素（10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L）孵育24小時，油紅O染色觀察細胞形態(tài)和細胞內(nèi)脂滴的形成情況，高效液相色譜法檢測細胞內(nèi)甘油三酯的含量，半定量RT-PCR法檢測MTP、OB-Rb和STAT3的mRNA表達。從而確定瘦素改善細胞脂肪變性的最佳濃度，作出量效關系。然后以瘦素最佳濃度分別孵育模型組細胞0

3、h、6h、12h、24h、48h，使用上述觀察方法，從而確定瘦素改善細胞脂肪變性的最佳時間，作出時效關系。實驗數(shù)據(jù)以±s表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，以P<0.05作為差異顯著性標準。 結果：用脂肪乳注射液孵育人肝L-02細胞24小時后，經(jīng)油紅O染色后倒置顯微鏡觀察，人肝L-02細胞漿內(nèi)見大量紅色的小泡性脂滴；高效液相色譜法檢測示細胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增高，成功的制備肝細胞脂肪變性模型。加入瘦素（10-8mol

4、/L、10-7mol/L、10-6mol/L）孵育24小時后，油紅O染色示胞漿內(nèi)脂滴與模型組比較明顯減低；高效液相色譜法結果發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)甘油三酯含量隨瘦素劑量的增高而降低；半定量RT-PCR法檢測各組細胞的OB-Rb及其目標基因STAT3、MTP的mRNA水平，結果顯示：瘦素處理組較模型組相比，OB-Rb及其目標基因的mRNA表達明顯上升，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。以瘦素（10-7mol/L）濃度為處理濃度，分別孵育模型組細胞0h、6

5、h、12h、24h、48h后，結果發(fā)現(xiàn)：瘦素呈時間依賴性的降低脂變細胞內(nèi)甘油三酯含量，同時呈時間依賴性的增加OB-Rb及其目標基因的mRNA的表達。 結論： 1.瘦素能降低體外人L-02脂變肝細胞內(nèi)甘油三酯的含量，呈時間、劑量依賴關系。 2.瘦素能促進OB-Rb及其目標基因STAT3、MTP 基因的表達增強，呈劑量依賴關系。 3.瘦素降低細胞內(nèi)甘油三酯作用可能與OB-Rb及其目標基因表達上調(diào)有關。