RNA干擾技術(shù)沉默A-FABP基因?qū)χ炯?xì)胞合成甘油三酯及分泌內(nèi)脂素的影響.pdf

1、目的:觀察經(jīng)RNA干擾技術(shù)沉默脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(A-FABP)基因后,對(duì)脂肪細(xì)胞甘油三酯(triglyceride,TG)合成及內(nèi)脂素(visfatin)分泌的影響。
　　方法:將3T3-L1前脂肪細(xì)胞采用體外誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞,將脂肪細(xì)胞與0~1 mmol/L不同濃度脂肪酸共孵育后,測(cè)定其甘油三酯及內(nèi)脂素的濃度。構(gòu)建針對(duì)A-FABP基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)質(zhì)粒表達(dá)載體,將上述載體轉(zhuǎn)染3T3-L1

2、脂肪細(xì)胞,用RT-PCR和Western Blot檢測(cè)A-FABP基因及蛋白的表達(dá)。將脂肪細(xì)胞分為四組,即對(duì)照組:成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞、RNAi組: miRNA質(zhì)粒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的3T3-L1脂肪細(xì)胞、脂肪酸1組:成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞+0.5mmol/l脂肪酸、脂肪酸2組: miRNA質(zhì)粒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的3T3-L1脂肪細(xì)胞+0.5 mmol/l脂肪酸,分別測(cè)定各組細(xì)胞甘油三酯及內(nèi)脂素濃度的變化。用RT–PCR檢測(cè)A-FABP基

3、因沉默前后脂肪細(xì)胞內(nèi)脂素mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:1.隨著脂肪酸濃度的增高,與其共孵育的脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯濃度也隨著增加(P<0.05),其分泌的內(nèi)脂素濃度也隨著增加(P<0.05)。
　　2.構(gòu)建A-FABP miRNA質(zhì)粒載體,轉(zhuǎn)染脂肪細(xì)胞后,能顯著抑制脂肪細(xì)胞A-FABP的mRNA及蛋白表達(dá)水平(P<0.05)。
　　3.沉默A-FABP基因后脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯濃度明顯低于沉默前(P<0.05),其分泌的內(nèi)