慢病毒介導(dǎo)的人SLC2A9基因過表達對人近曲小管上皮細胞尿酸轉(zhuǎn)運功能的影響.pdf

1、背景：腎臟尿酸結(jié)石是泌尿系結(jié)石中常見的類型，僅次于含鈣結(jié)石，約占泌尿系結(jié)石的10％-40%。尿酸結(jié)石的成石機制主要包括3個方面：尿pH值降低、尿量減少及高尿酸尿，其中高尿酸尿是誘發(fā)尿酸結(jié)石的關(guān)鍵因素之一。在人體，尿酸排泄主要是通過腎臟進行代謝的。經(jīng)腎臟濾過的尿酸有90%被腎臟上皮細胞重吸收，只有10%的尿酸隨尿液排出體外。因而尿液中尿酸水平的高低取決于腎對尿酸的重吸收程度。近年來的研究表明SLC2A9基因編碼的GLUT9蛋白可以將尿酸吸

2、收至腎小管上皮細胞胞漿內(nèi)，從而調(diào)控尿酸的重吸收，并且已有多項人群基因篩查研究顯示出SLC2A9基因與尿酸轉(zhuǎn)運之間存在很強的相關(guān)性，因此，SLC2A9基因被認為是尿酸轉(zhuǎn)運的一個重要的調(diào)控元件。本研究利用高效轉(zhuǎn)染的慢病毒作為載體構(gòu)建SLC2A9過表達質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染入永生化人腎臟近曲小管上皮細胞株HK-2中，驗證SLC2A9基因過表達對尿酸轉(zhuǎn)運功能的影響，同時為后期探討SLC2A9基因遺傳變異對尿酸結(jié)石的影響奠定基礎(chǔ)。
　　目的：將SL

3、C2A9基因載入慢病毒顆粒，探討SLC2A9基因過表達慢病毒顆粒感染人近曲小管上皮細胞HK-2后對其尿酸轉(zhuǎn)運功能的影響。
　　方法：PCR反應(yīng)擴增目的基因后載入慢病毒表達載體中構(gòu)建重組載體pLEX-SLC2A9，使用PCR及測序的方法對其進行鑒定，并與輔助包裝質(zhì)粒共感染293T細胞。慢病毒顆粒感染HK-2細胞后，用PCR和Western blot檢測SLC2A9基因的過表達效率，并檢測SLC2A9過表達對其尿酸轉(zhuǎn)運功能的影響。

4、r>　　結(jié)果：PCR及測序結(jié)果表明重組慢病毒載體pLEX-SLC2A9的插入序列完全正確，重組慢病毒載體感染 HK-2細胞后，細胞內(nèi)的mRNA及蛋白水平增高，并且可以增強HK-2細胞對尿酸的轉(zhuǎn)運。
　　結(jié)論：成功構(gòu)建了pLEX-SLC2A9慢病毒表達載體，并證實了這一慢病毒轉(zhuǎn)染后SLC2A9基因的過表達可以顯著增強HK-2細胞的尿酸轉(zhuǎn)運能力，為以后進一步研究SLC2A9基因的功能、尿酸轉(zhuǎn)運機制及在尿酸結(jié)石形成過程中的作用奠定了基礎(chǔ)