腺病毒介導的slit2 shRNA轉染缺氧誘導的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞對VEGF表達的影響.pdf

1、目的:
　　觀察腺病毒介導的slit2 shRNA轉染缺氧誘導的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(retinal pigment epithelial cells RPE)對血管內皮生長因子(vascularendothelial growth factor VEGF)表達的影響，探討slit2在脈絡膜新生血管中的可能作用，為脈絡膜新生血管(CNV)的治療提供新的思路。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)人RPE細胞，RT-PCR、免疫

2、組化鑒定slit2及其受體在人RPE上的表達;
　　2.200μ mol/L氯化鈷建立化學缺氧模型，未缺氧細胞作為空白對照組，Real-TimePCR，western-blot觀察slit2及受體、VEGF在缺氧狀態(tài)下的表達變化;
　　3.將缺氧的RPE細胞隨機分為Ad-shRNA(加入slit2 shRNA)，Ad-nμ ll（加入空腺病毒）、缺氧組。24h后收取細胞，Real-TimePCR、western-blot分別

3、檢測各組slit2及其受體、VEGF的mRNA和蛋白水平表達變化，ELISA檢測上清中VEGF蛋白的表達變化。
　　結果:
　　1.在正常人RPE細胞，即有slit2及其受體Robo1、Robo4的表達;
　　2.與空白對照組相比，缺氧組中slit2及其受體Robo1、VEGF的mRNA和蛋白水平的表達均明顯增加(P＜0.05);但受體R obo4無明顯變化;
　　3.與缺氧組相比，slit2 shRNA轉染后A