淡紫擬青霉的發(fā)酵條件研究及其與線蟲互作機(jī)理研究方法的初探.pdf

1、植物線蟲對(duì)許多經(jīng)濟(jì)作物造成嚴(yán)重的危害，可導(dǎo)致作物大幅減產(chǎn)。對(duì)于植物線蟲的防治，歷來以化學(xué)藥劑為主，而化學(xué)藥劑帶來的負(fù)面影響，使得生物防治的研究成為熱點(diǎn)。淡紫擬青霉屬于內(nèi)寄生性真菌，是一些植物寄生線蟲的重要天敵，能夠寄生于卵，也能侵染幼蟲和雌蟲，從而影響其正常的生長(zhǎng)發(fā)育。目前，該茵已經(jīng)作為生物殺線劑工業(yè)化生產(chǎn)了。 本研究對(duì)本實(shí)驗(yàn)室兩淡紫擬青霉菌株進(jìn)行了最佳發(fā)酵參數(shù)的測(cè)定；利用不同的液體培養(yǎng)基對(duì)淡紫擬青霉的不同指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)其

2、指標(biāo)進(jìn)行了相關(guān)性分析；對(duì)淡紫擬青霉與線蟲互作機(jī)理作了初步的分子研究。其結(jié)果如下： 1．通過對(duì)淡紫擬青霉(PL1與PL2)發(fā)酵參數(shù)：溫度、通氣量、轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、接種量的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)得出：淡紫擬青霉最佳生長(zhǎng)溫度為28℃；最佳裝瓶量為100ml；最佳轉(zhuǎn)速為120 rpm；最佳培養(yǎng)時(shí)間為7-9d；適宜生長(zhǎng)PH值為6-9；容積為250ml的錐形瓶，裝瓶量為150ml，其最佳接種量為1個(gè)直徑為0.5cm的菌塊，。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)PL1在各

3、種不同發(fā)酵參數(shù)下其產(chǎn)孢量均比PL2高，所以PL1菌株優(yōu)于PL2。 2．通過不同的液體培養(yǎng)基對(duì)淡紫擬青霉進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)孢子濃度、菌體重量、上清液毒力、上清液中的蛋白酶活性進(jìn)行了測(cè)定，得到一種高產(chǎn)孢量的培養(yǎng)基，其主要成分為：PS+eggyolk，為工業(yè)化生產(chǎn)提供選擇性材料。在10天內(nèi)，孢子濃度與菌體重量基本上隨時(shí)間先呈遞增變化，然后基本保持恒定；而上清液毒力與蛋白酶活力隨時(shí)間呈上下波動(dòng)或逐漸遞增。通過相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)孢子濃度和菌體重量

4、之間的相關(guān)性較高，上清液毒力與蛋白酶活力之間的相關(guān)性較低。 3．根據(jù)淡紫擬青霉的絲氨酸蛋白酶基因、幾丁質(zhì)酶基因、甘露聚糖酶基因和線蟲基因設(shè)計(jì)了五對(duì)引物：β-tubulin、chittinase、 serine proteinase、mannanase、β-actin，通過引物特異性分析，驗(yàn)證了前四對(duì)引物為淡紫擬青霉的特異性引物，這就為進(jìn)一步研究蟲菌互作機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)在于國內(nèi)外首次研究淡紫擬青霉與線蟲互作