熒光嗜鐵素的發(fā)酵條件及其應用初探.pdf

1、本試驗對采集自上海青浦、松江、奉賢、南匯、浦東、嘉定等地區(qū)的104株熒光假單胞菌進行了CAS固體平板檢測和CAS檢測液檢測，比較了不同菌株產(chǎn)生PVD熒光嗜鐵素的產(chǎn)量，從中篩選出高產(chǎn)菌株SE-6，其PVD相對含量達到0.654。研究了熒光假單胞菌株SE-6在搖瓶培養(yǎng)下的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件。通過單因素實驗和正交優(yōu)化實驗，確定了最佳發(fā)酵培養(yǎng)基(1L)組成為甘油1.5g，水解酪蛋白1.0g，硫酸鎂2.5g，磷酸氫二鉀2.5g，發(fā)酵條件為溫度28℃

2、，起始pH6.5，接種量2﹪，裝瓶量200mL/500mL，發(fā)酵時間46h左右，F(xiàn)e3+濃度0.8mg/L時，SE-6菌株分泌的PVD量達到最大。 對SE-6菌株的發(fā)酵液進行了分離純化。發(fā)酵液先經(jīng)過離心后，除去菌體，再經(jīng)過有機溶劑抽提，然后用SephadexG-25柱層析分離，得到了PVD提取液。用傅立葉變換紅外光譜研究了PVD的主要功能集團，用Arnow分析法和Atkin分析法研究了嗜鐵素的類型。前者用于兒茶酚型嗜鐵索的檢驗，

3、后者用于氧肟酸型嗜鐵素的檢驗。結(jié)果顯示Arnow分析和Atkin分析均成陽性，說明PVD既含有兒茶酚基團又含有氧肟酸基團，是一類混合型嗜鐵素。 本試驗還利用PVD在螯合鐵離子前后其在特定波長的吸光值會發(fā)生改變這一特性，設計了一種用PVD來檢測水環(huán)境中鐵離子的方法。首先建立了PVD吸光值變化和鐵離子濃度之間的標準曲線，F(xiàn)e3+在0-2.25×10-6mol.L-1范圍內(nèi)遵守比爾定律?；貧w方程是：y=-0.00014+0.11123