2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、細(xì)菌視紫紅質(zhì)(BR)是目前被研究的最多,了解最為透徹的色素蛋白之一,它是鹽沼鹽桿菌(Halobacterium salinarum)的紫膜中存在的一類納米色素蛋白,在光照條件下合成,與植物中的葉綠素和動物視網(wǎng)膜中的視黃醛一樣,都具備光敏性。細(xì)菌視紫紅質(zhì)具有獨特的光致變色效應(yīng),并且便于制備成薄膜材料,是非常有發(fā)展前途與研究價值的生物光學(xué)材料。這種具備良好生物活性的光敏蛋白質(zhì)具備重大的理論與實踐研究意義。
  本實驗通過單因素研究和正

2、交試驗對鹽沼鹽桿菌的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,并對菌體生物量與其產(chǎn)物細(xì)菌視紫紅質(zhì)的量進(jìn)行測定,同時分離純化BR蛋白制備復(fù)合生物薄膜材料。本論文主要研究工作及結(jié)果如下:
  以提高鹽沼鹽桿菌生物量及BR蛋白量為目的,對鹽沼鹽桿菌培養(yǎng)基及其發(fā)酵條件進(jìn)行系統(tǒng)的優(yōu)化,由于鹽沼鹽桿菌中紫膜合成需要光照,本實驗同時測定了光照強(qiáng)度對BR蛋白量的影響。對復(fù)合碳氮源種類進(jìn)行篩選,在此基礎(chǔ)上通過正交試驗對鹽沼鹽桿菌培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化,最終確立了最優(yōu)培養(yǎng)基:酸

3、水解酪蛋白5.0g,氯化鈉200 g,酵母浸粉15.0g,硫酸鎂20.0 g,二水合檸檬酸三鈉3.0 g,硫酸亞鐵銨35 mg,氯化鉀1.0 g,硫酸錳0.4g,定容至1L;通過對鹽沼鹽桿菌液體培養(yǎng)條件進(jìn)行篩選,確立了最適培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度:33.09μmol/m2s,發(fā)酵時間:7 d、溫度:37℃、轉(zhuǎn)速:150 r/min、初始pH:7.0、接種量:8%。BR蛋白的產(chǎn)量由42.90 mg/L增加到了66.50 mg/L,增加了35.

4、4%,和已報導(dǎo)的產(chǎn)量35.0 mg/L相比增加了47.3%。
  通過液體培養(yǎng)獲得鹽沼鹽桿菌發(fā)酵液,離心收集菌體,透析破碎菌體,通過差速離心法棄去菌體碎片與雜質(zhì),并在12000 rpm下離心提取細(xì)菌視紫紅質(zhì),收集紫紅色沉淀,并多次鹽洗、水洗純化BR蛋白,然后使用蔗糖密度梯度離心法分離蛋白,再利用冷凍干燥法獲取BR蛋白干粉。
  通過紫外可見分光光度計、SDS-PAGE凝膠電泳與原子力顯微鏡分析了蛋白的純度與結(jié)構(gòu),通過與已報導(dǎo)

5、的結(jié)果相對比,以及純度測量,表明本實驗提取的為 BR蛋白,且純度為85.3%,純度達(dá)到實驗所需。蔗糖密度梯度離心后蛋白純度超過90%。
  制備混合均勻的BR蛋白溶液,與生物材料PVA薄膜、PLGA薄膜以及PEGDA水凝膠薄膜結(jié)合。并測定溶劑澆鑄制膜中PVA/BR膜中細(xì)菌視紫紅質(zhì)的光致變色性能,以及原位聚合成膜中PLGA/BR與PEGDA/BR膜的性能。結(jié)果表明本實驗獲取的BR蛋白具備光致變色性能,還能夠應(yīng)用于制備功能化的生物材料

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