皮質(zhì)抑素在尋常型銀屑病中的表達及外源性皮質(zhì)抑素對EGF誘導的HaCaT細胞增殖模型的影響.pdf

1、目的:檢測皮質(zhì)抑素(CST)在尋常型銀屑病病人血漿及皮膚中的表達,并在表皮生長因子(EGF)誘導的HaCaT細胞增殖模型中觀察外源性應(yīng)用CST對HaCaT細胞增殖的影響,初步探討CST在銀屑病發(fā)病機制中的作用。
　　 方法:
　　 1.ELISA法檢測72例尋常型銀屑病和76例正常對照組血漿中的CST的表達,免疫組化方法檢測14例銀屑病病人(取自上述72例中)皮損區(qū)及正常對照皮膚中的CST的表達。
　　 2.1×

2、106/孔HaCaT細胞種六孔板,培養(yǎng)24小時后,細胞免疫組化方法檢測HaCaT中CST蛋白的表達,RT-PCR方法檢測CSTmRNA的表達。
　　 3.按5000/孔接種HaCaT細胞至96孔板,待細胞貼壁后,換含10ng/ml EGF的RPMI-1640培基,外源性給予不同濃度的CST(10-9-10-6M)處理含10 ng/ml EGF的HaCaT細胞24小時,MTT法檢測細胞增殖的改變,重復三次,觀察外源性CET對EGF

3、誘導的HaCaT細胞增殖的影響并選取最佳皮質(zhì)抑素濃度進行后續(xù)實驗。
　　 4.細胞免疫組化方法檢測無CST和EGF的HaCaT細胞組(空白組),含10 ng/ml EGF的HaCaT細胞組(對照組)及含10-6M CST和10 ng/ml EGF的HaCaT細胞組(實驗組)三組中增殖指標Ki-67的變化。
　　 5.酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA法)檢測以上三組的第二信使cAMP的變化。
　　 結(jié)果:
　　

4、 1.銀屑病病人血漿及皮損中皮質(zhì)抑素的表達較正常對照組均顯著下降,但銀屑病病人血漿CST表達水平與PASI積分無顯著相關(guān)性。
　　 2.CST蛋白在HaCaT細胞胞漿中有表達。且CSTmRNA(173bp)在HaCaT細胞有表達。
　　 3.不同濃度CST(10-9-10-6 M)呈濃度依賴性抑制10 ng/ml的EGF誘導的HaCaT細胞的增殖。在10-6M時有最好的抑制效應(yīng),抑制率54.62％。
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