生長(zhǎng)抑素阻斷瘦素誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞增殖及基質(zhì)分泌的分子機(jī)制探究.pdf

1、目的：
　　研究生長(zhǎng)抑素(SST)與酪氨酸蛋白酶1B(PTP1B)對(duì)瘦素誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞(HSC)的增殖和基質(zhì)蛋白分泌以及對(duì)JAK2/STAT3通路的影響,探究PTP1B在生長(zhǎng)抑素抗瘦素致肝星狀細(xì)胞基質(zhì)蛋白分泌中的作用。
　　方法：
　　本課題以人肝星狀細(xì)胞株LX-2為研究對(duì)象
　　運(yùn)用MTT法檢測(cè)各濃度生長(zhǎng)抑素對(duì)瘦素致激活的HSC細(xì)胞增殖的影響；實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、瘦素組(100 ng/ml)和生長(zhǎng)抑素濃度組(1

2、00ng/ml瘦素+生長(zhǎng)抑素濃度10-6、10-7、10-8、10-9 mol/L)，作用24h后，檢測(cè)LX-2細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的情況。根據(jù)MTT結(jié)果，選取適當(dāng)生長(zhǎng)抑素濃度，實(shí)驗(yàn)分為①對(duì)照組，②100ng/ml瘦素組，③100ng/ml瘦素+10-6mol/L生長(zhǎng)抑素組，④100ng/ml瘦素+10-7mol/L生長(zhǎng)抑素組，作用24h后，運(yùn)用RT-PCR、Western blot、ELISA法分別檢測(cè)各組PTP1B、TIMP-1、I型膠原

3、蛋白和mRNA以及JAK2/STAT3磷酸化程度。
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果顯示：生長(zhǎng)抑素可抑制瘦素致LX-2的增殖，并呈劑量相關(guān)性，以10-6 mol/L濃度時(shí)最為明顯，抑制率為29.29％。生長(zhǎng)抑素各濃度組與瘦素對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，瘦素組顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)；
　　2.①、RT-PCR結(jié)果：PTP1BmRNA相對(duì)表達(dá)量：瘦素組顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05)，兩生長(zhǎng)抑素組較

4、之瘦素組明顯升高(P<0.05)，并且高生長(zhǎng)抑素組提高較低生長(zhǎng)抑素組明顯(P<0.05)；TIMP-1mRNA相對(duì)表達(dá)量：瘦素組顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，兩梯度生長(zhǎng)抑素組較之瘦素組顯著降低(P<0.05)，生長(zhǎng)抑素組之間并無(wú)明顯差異(P＞0.05)；I型膠原 mRNA相對(duì)表達(dá)量：瘦素組相比空白對(duì)照組明顯提高(P<0.05)，兩生長(zhǎng)抑素組較之瘦素組明顯降低(P<0.05)，其中，高生長(zhǎng)抑素降低更明顯(P<0.05)。
　　

5、②、Western Blots結(jié)果：PTP1B蛋白相對(duì)表達(dá)量：瘦素組顯著低于空白對(duì)照組(P<0.05)，兩生長(zhǎng)抑素組較之瘦素組明顯升高(P<0.05)，并且高生長(zhǎng)抑素組提高較低生長(zhǎng)抑素組明顯(P<0.05)；p-JAK2蛋白相對(duì)表達(dá)量：瘦素組相比空白對(duì)照組明顯提高(P<0.05)，兩生長(zhǎng)抑素組較之瘦素組明顯降低(P<0.05)，其中，高生長(zhǎng)抑素相比低生長(zhǎng)抑素組降低更明顯(P<0.05)；p-STAT3磷酸化相對(duì)表達(dá)量：瘦素組相比空白對(duì)照

6、組明顯提高(P<0.05)，兩生長(zhǎng)抑素組較之瘦素組明顯降低(P<0.05)，其中，高生長(zhǎng)抑素相比低生長(zhǎng)抑素組降低更明顯(P<0.05)。
　?、邸LISA結(jié)果：瘦素組與空白對(duì)照組相比，可以顯著刺激 I型膠原蛋白的分泌(P<0.05)，生長(zhǎng)抑素各組與瘦素組相比可以明顯降低I型膠原的分泌(P<0.05)，其中，10-6mol/L生長(zhǎng)抑素組I型膠原蛋白表達(dá)量要低于10-7mol/L生長(zhǎng)抑素組(P<0.05)。
　　結(jié)論：