胃癌組織中ZAC與生長(zhǎng)抑素及生長(zhǎng)抑素受體的表達(dá).pdf

1、胃腸道D細(xì)胞可分泌生長(zhǎng)抑素(somatostatin,SST),SST是一種循環(huán)的小肽,它有兩種生物活性形式:14個(gè)氨基酸構(gòu)成的SST-14和28個(gè)氨基酸構(gòu)成的SST-28。SST由較大的前體分子前原SST和原SST水解形成。SST抑制胃腸道一系列的生理功能如胃腸運(yùn)動(dòng)、胃酸產(chǎn)生、胰酶分泌和膽汁分泌。SST還抑制胰和腸道激素如胰島素、胰高血糖素、分泌素和血管活性腸肽的分泌。除在神經(jīng)傳遞和分泌的重要調(diào)節(jié)功能,SST還可調(diào)控正常組織和腫瘤的細(xì)

2、胞增殖。SST通過與生長(zhǎng)抑素受體(somatostatin receptor,SSTR)結(jié)合發(fā)揮其生理功能。SSTR屬于G蛋白耦聯(lián)受體(G protein-coupled receptor,GPCR),共有5種亞型,分別稱為SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4和SSTR5。編碼5種SSTR亞型的基因分別位于不同的染色體。SSTR2 mRNA通過選擇性剪接可產(chǎn)生兩種不同的SSTR2:SSTR2A和SSTR2B。SSTR與胃癌發(fā)生

3、的關(guān)系缺乏系統(tǒng)的研究,僅見單個(gè)SSTR亞型與胃癌的研究報(bào)道。介導(dǎo)SST抗增殖效應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子和靶基因的研究很少。ZAC(zinc fingerprotein which regulates apoptosis and cell cycle arrest)為一種具有鋅指(zinc finger)結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子,具有DNA結(jié)合和轉(zhuǎn)錄活化活性,可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)比較觀察胃癌組織、癌旁組織和

4、相應(yīng)的正常胃黏膜組織中SST和ZAC的表達(dá);應(yīng)用RT-PCR技術(shù)比較顯示胃癌組織、癌旁組織和相應(yīng)的正常胃黏膜組織中SSTR亞型的表達(dá)譜;分析胃癌組織中SST、SSTR與ZAC的表達(dá)的相關(guān)性及其與胃癌臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。
　　材料與方法：1.材料胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織標(biāo)本各30例。標(biāo)本分為2部分,液氮凍存用于RT-PCR,石蠟包埋用于免疫組織化學(xué)。2.免疫組織化學(xué)采用SABC免疫組織化學(xué)方法,按試劑盒(BOSTER公

5、司)說明書操作。ZAC免疫反應(yīng)信號(hào)采用鏈霉親和素-過氧化物酶-DAB顯示;SST免疫反應(yīng)信號(hào)采用鏈霉親和素-過氧化物酶-AEC顯示。以PBS替代一抗為陰性對(duì)照。蘇木素復(fù)染胞核。3.RT-PCR SSTR1:上游,AGCCGGTTGACTATTACGCC,下游,GCTCTCACTTCTACCATTGTC;SSTR2:上游,GGTGAAGTCCTCTGGAATCC,下游,CCATTGCCAGTAGACAGAGC;SSTR3:上游,TCATC

6、TGCCTCTGCTACCTG,下游,GAGCCCAAAGAAGGCAGGCT;SSTR4:上游,CGGCAGTCTTCGT GGTCTAC,下游,GCATCAAGGCTGGTCACGAC;SSTR5:上游,AACACGCTGGTCATCTACGTGGT,下游,AGACACTGGTGAACTGGTTGAC。采用一步法進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。50℃,30 min;94℃,2 min;94℃,30s;60℃,30s:72℃,30s;10個(gè)循環(huán)

7、。94℃,30s;55℃,30s;72℃,40s;25個(gè)循環(huán)。72℃,2 min。1.5％瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,以P<0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1.胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織SST陽(yáng)性表達(dá)率分別為36.7％(11/30)、53.3％(16/30)和73.3％(22/30)。胃癌組織中SST的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常胃黏膜組織(P<0.05)。2.胃癌組織

8、中5種SSTR亞型均有表達(dá),但其表達(dá)頻率不同,分別為SSTR1(40.0％,12/30)、SSTR2(73.3％,22/30)、SSTR3(33.3％,10/30)、SSTR4(53.3％,16/30)和SSTR5(56.7％,17/30),以SSTR2的陽(yáng)性率最高,SSTR3的陽(yáng)性率最低。3.胃癌組織中SSTR3的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常胃黏膜組織;而SSTR2和SSTR5的陽(yáng)性表達(dá)率則顯著高于正常胃黏膜組織,SSTR1和SSTR4的陽(yáng)

9、性率無顯著性差異。高分化胃癌組織SSTR3的陽(yáng)性率顯著高于低分化胃癌組織。4.胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織均有ZAC的表達(dá),其陽(yáng)性率分別為33.3％(10/30)、73.3％(22/30)和66.7％(20/30),胃癌組織中ZAC的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于正常胃黏膜組織。高中分化胃癌組織中,ZAC的表達(dá)明顯高于低分化胃癌組織;浸潤(rùn)未侵犯漿膜者明顯高于侵犯漿膜者。ZAC的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯關(guān)系。5.胃癌組織中,ZAC與SST的表達(dá)呈