胃癌組織中ZAC與生長抑素及生長抑素受體的表達.pdf

1、胃腸道D細胞可分泌生長抑素(somatostatin,SST),SST是一種循環(huán)的小肽,它有兩種生物活性形式:14個氨基酸構成的SST-14和28個氨基酸構成的SST-28。SST由較大的前體分子前原SST和原SST水解形成。SST抑制胃腸道一系列的生理功能如胃腸運動、胃酸產生、胰酶分泌和膽汁分泌。SST還抑制胰和腸道激素如胰島素、胰高血糖素、分泌素和血管活性腸肽的分泌。除在神經傳遞和分泌的重要調節(jié)功能,SST還可調控正常組織和腫瘤的細

2、胞增殖。SST通過與生長抑素受體(somatostatin receptor,SSTR)結合發(fā)揮其生理功能。SSTR屬于G蛋白耦聯受體(G protein-coupled receptor,GPCR),共有5種亞型,分別稱為SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4和SSTR5。編碼5種SSTR亞型的基因分別位于不同的染色體。SSTR2 mRNA通過選擇性剪接可產生兩種不同的SSTR2:SSTR2A和SSTR2B。SSTR與胃癌發(fā)生

3、的關系缺乏系統的研究,僅見單個SSTR亞型與胃癌的研究報道。介導SST抗增殖效應的轉錄因子和靶基因的研究很少。ZAC(zinc fingerprotein which regulates apoptosis and cell cycle arrest)為一種具有鋅指(zinc finger)結構的轉錄因子,具有DNA結合和轉錄活化活性,可抑制腫瘤細胞生長,誘導細胞凋亡和細胞周期阻滯。本研究應用免疫組織化學技術比較觀察胃癌組織、癌旁組織和

4、相應的正常胃黏膜組織中SST和ZAC的表達;應用RT-PCR技術比較顯示胃癌組織、癌旁組織和相應的正常胃黏膜組織中SSTR亞型的表達譜;分析胃癌組織中SST、SSTR與ZAC的表達的相關性及其與胃癌臨床病理學特征的相關性。
　　材料與方法：1.材料胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織標本各30例。標本分為2部分,液氮凍存用于RT-PCR,石蠟包埋用于免疫組織化學。2.免疫組織化學采用SABC免疫組織化學方法,按試劑盒(BOSTER公

5、司)說明書操作。ZAC免疫反應信號采用鏈霉親和素-過氧化物酶-DAB顯示;SST免疫反應信號采用鏈霉親和素-過氧化物酶-AEC顯示。以PBS替代一抗為陰性對照。蘇木素復染胞核。3.RT-PCR SSTR1:上游,AGCCGGTTGACTATTACGCC,下游,GCTCTCACTTCTACCATTGTC;SSTR2:上游,GGTGAAGTCCTCTGGAATCC,下游,CCATTGCCAGTAGACAGAGC;SSTR3:上游,TCATC

6、TGCCTCTGCTACCTG,下游,GAGCCCAAAGAAGGCAGGCT;SSTR4:上游,CGGCAGTCTTCGT GGTCTAC,下游,GCATCAAGGCTGGTCACGAC;SSTR5:上游,AACACGCTGGTCATCTACGTGGT,下游,AGACACTGGTGAACTGGTTGAC。采用一步法進行RT-PCR反應。50℃,30 min;94℃,2 min;94℃,30s;60℃,30s:72℃,30s;10個循環(huán)

7、。94℃,30s;55℃,30s;72℃,40s;25個循環(huán)。72℃,2 min。1.5％瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。4.統計學處理應用SPSS10.0統計軟件對數據進行統計學處理,以P<0.05為檢驗水準。
　　結果：1.胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織SST陽性表達率分別為36.7％(11/30)、53.3％(16/30)和73.3％(22/30)。胃癌組織中SST的陽性表達率顯著低于正常胃黏膜組織(P<0.05)。2.胃癌組織

8、中5種SSTR亞型均有表達,但其表達頻率不同,分別為SSTR1(40.0％,12/30)、SSTR2(73.3％,22/30)、SSTR3(33.3％,10/30)、SSTR4(53.3％,16/30)和SSTR5(56.7％,17/30),以SSTR2的陽性率最高,SSTR3的陽性率最低。3.胃癌組織中SSTR3的陽性表達率明顯低于正常胃黏膜組織;而SSTR2和SSTR5的陽性表達率則顯著高于正常胃黏膜組織,SSTR1和SSTR4的陽

9、性率無顯著性差異。高分化胃癌組織SSTR3的陽性率顯著高于低分化胃癌組織。4.胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織均有ZAC的表達,其陽性率分別為33.3％(10/30)、73.3％(22/30)和66.7％(20/30),胃癌組織中ZAC的陽性表達率顯著低于正常胃黏膜組織。高中分化胃癌組織中,ZAC的表達明顯高于低分化胃癌組織;浸潤未侵犯漿膜者明顯高于侵犯漿膜者。ZAC的表達與淋巴結轉移無明顯關系。5.胃癌組織中,ZAC與SST的表達呈