雷竹14-3-3基因家族克隆和功能分析.pdf

1、14-3-3蛋白是廣泛存在于真核生物中一類高度保守的蛋白,在植物中,14-3-3蛋白調(diào)控一系列生理生化過程。擬南芥中14-3-3蛋白與CO互作調(diào)控光周期途徑從而調(diào)控開花,水稻中14-3-3蛋白與FT互作對開花起負調(diào)控作用,因此,14-3-3家族基因的克隆對營養(yǎng)生長周期比較長的竹類植物成花機理的研究有重要的意義。本研究從雷竹(Phyllostachys violascens)中獲得4個14-3-3家族基因,進行了表達特性分析,通過轉(zhuǎn)基因?qū)?/p>

2、其進行功能分析,探究其蛋白質(zhì)的亞細胞定位;利用酵母雙雜交研究雷竹GF14c蛋白與雷竹FT之間的相互作用,主要的研究結(jié)果如下:
　　1、從雷竹中克隆到4個14-3-3蛋白同源基因,分別命名PvGF14b、PvGF14c、PvGF14e、PvGF14f,PvGF14b基因組DNA全長為2160bp,cDNA全長958bp,包含5個外顯子和4個內(nèi)含子,編碼262個氨基酸殘基。PvGF14c基因組DNA全長為1935bp, cDNA全長1

3、086bp,包含5個外顯子和4個內(nèi)含子,編碼256個氨基酸殘基。PvGF14e基因組DNA全長為2130bp,cDNA全長882bp,包含5個外顯子和4個內(nèi)含子,編碼262個氨基酸殘基。PvGF14f基因組DNA全長為2160bp,cDNA全長1045bp,包含5個外顯子和4個內(nèi)含子,編碼261個氨基酸殘基。
　　2、RT-PCR分析顯示,這4個基因在開花前后的表達量沒有差異,且PvGF14c在開花前后的表達量比其他3個基因高。P

4、vGF14b、PvGF14c在24小時內(nèi)均有表達,無晝夜節(jié)律性。PvGF14b在根、莖、花中表達量稍高,其次是老葉,在幼葉的中表達量較低;PvGF14 c在葉中表達量最高,在莖中表達量微量表達;在根和花中沒有檢測到表達,PvGF14e在根中表達量最低;PvGF1f在莖中表達量最高,其次是老葉和花,在幼葉中表達量微量表達,在根中沒有檢測到表達。提示PvGF14 c可能與雷竹開花有關。
　　3、構(gòu)建PvGF14c-GFP融合表達載體,