5-FU及衍生物對(duì)細(xì)胞系SHEE及癌化株SHEEC放射增敏研究.pdf

1、目的：探討5-FU及其衍生物對(duì)食管永生化上皮細(xì)胞系SHEE及其癌化株SHEEC放射增敏后抑制率的影響，并探索其分子機(jī)制，進(jìn)一步為5-FU及其衍生物在食管癌放射增敏的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.收集患者口服Capecitabine及S-1前、后血清，應(yīng)用高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）分析法檢測(cè)血清中有效代謝物（5-Fu、5'-DFUR）的濃

2、度。
　　2.將細(xì)胞系SHEE、SHEEC分別分為36組，每組96復(fù)孔，采用0Gy、0.5Gy、1.0Gy、2.0Gy、4.0Gy、6.0Gy不同劑量射線分別照射3組，檢測(cè)其144h后存活率；采用2Gy射線分別照射3組，檢測(cè)其24h、48h、72h、96h、120h、144h后不同時(shí)間存活率。
　　3.將細(xì)胞系SHEE、SHEEC分別分為15組，每組96復(fù)孔，每3組分別給予Capecitabine血清、5'-DFUR、S-1

3、血清、5-Fu增敏以及空白對(duì)照組、然后給予2Gy射線照射，144h后應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）快速比色法檢測(cè)細(xì)胞系SHEE、SHEEC抑制率。
　　4.將細(xì)胞系 SHEE、SHEEC分別分為18組，每組6復(fù)孔，每3組采用Capecitabine血清、S-1血清增敏以及空白對(duì)照組，然后給予2Gy射線照射，144h后應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞系SHEE、SHEEC凋亡蛋白 Bax，Bcl-2表達(dá)率。
　　結(jié)果:
　　1.口服

4、 Capecitabine及S-1前血清均未檢測(cè)到有效的代謝物5'-DFUR及5-Fu；口服 Capecitabine后血清中有效代謝物5-Fu及5'-DFUR的濃度分別為101ng/ml、2763ng/ml；口服 S-1后血清中有效代謝物5-Fu的濃度為4936ng/ml。
　　2.射線劑量為0.5Gy、1.0Gy、2.0Gy、4.0Gy、6.0Gy照射細(xì)胞系 SHEE144h后存活率分別為93.62％、87.68%、80.12

5、%、55.23%、41.07%；照射細(xì)胞系SHEEC144h后存活率分別為94.31%、89.49%、81.51%、56.57%、43.51%。2Gy射線劑量照射細(xì)胞系 SHEE24h、48h、72h、96h、120h、144h后存活率分別為114.15%、130.65%、143.67%、89.53%、85.48%、80.02%；照射細(xì)胞系SHEEC24h、48h、72h、96h、120h、144h后存活率分別為115.24%、131.

6、58%、145.50%、90.56%、86.71%、80.53%。
　　3. Capecitabine血清、5'-DFUR、S-1血清和5-Fu對(duì)細(xì)胞系 SHEE、SHEEC放射增敏的影響：
　?。?）單放組與濃度10%的Capecitabine血清對(duì)SHEE細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為32.67%、35.21%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；單放組與SHEEC細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為36.32%、51.62%，有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；濃度10%的 Capecitabine血清對(duì) SHEE及 SHEEC細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為35.21%、51.62%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　（2）單放組與濃度276.3ng/ml的5'-DFUR（與濃度10% Capecitabine血清中5'-DFUR的濃度相等）對(duì) SHEE細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為35.23%、37.64%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；單放組與 SHEEC

8、細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為38.65%、54.21%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P<0.05）；濃度276.3ng/ml的5'-DFUR對(duì)SHEE和SHEEC細(xì)胞增敏144h后的抑制率分別為37.64%、54.21%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　?。?）單放組與濃度10%的S-1血清對(duì)SHEE細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為31.62%、55.37%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；單放組與 SHEEC細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為3

9、2.61%、52.31%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；濃度10%的 S-1血清對(duì)SHEE及SHEEC細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為55.37%、52.31%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　（4）單放組與濃度493.6ng/ml的5-Fu（與濃度10%S-1血清中5-Fu的濃度相等）對(duì)SHEE細(xì)胞增敏144h后抑制率分別為31.32%、55.13%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P<0.05）；單放組與 SHEEC細(xì)胞增敏144h后抑制率

10、分別為32.51%、50.27%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；濃度493.6ng/ml的5-Fu對(duì)SHEE和SHEEC增敏作用144h后細(xì)胞的抑制率分別為55.13%、50.27%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　4. Capecitabine、S-1血清對(duì)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)變化的影響：
　　（1）單放組與濃度10% Capecitabine血清對(duì)SHEE細(xì)胞增敏144h后Bcl-2蛋白表達(dá)率分別為25%、23

11、%，增敏前后比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），Bax蛋白表達(dá)率分別為26%、28%，增敏前后比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；單放組與濃度10% Capecitabine血清對(duì)SHEEC細(xì)胞增敏144h后Bcl-2蛋白表達(dá)率分別為26%、15%，增敏前后比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），Bax蛋白表達(dá)率分別為27%、52%，增敏前后比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；單放組與濃度10%Capecitabine血清對(duì)SHEE和SHE

12、EC細(xì)胞增敏144h后Bcl-2蛋白表達(dá)率分別為23%、15%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），Bax蛋白表達(dá)率分別為28%、52%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　（2）單放組與濃度10%S-1血清對(duì)SHEE細(xì)胞增敏144h后Bcl-2蛋白表達(dá)率分別為24%、12%，增敏前后比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），Bax蛋白表達(dá)率分別為25%、51%，增敏前后比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；單放組與濃度10%S-1血清對(duì) SH

13、EEC細(xì)胞增敏144h后 Bcl-2蛋白表達(dá)率分別為26%、14%，增敏前后比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），Bax蛋白表達(dá)率分別為25%、53%，增敏前后比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），單放組與濃度10%S-1血清對(duì) SHEE和SHEEC細(xì)胞增敏144h后Bcl-2蛋白表達(dá)率分別為12%、14%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），Bax蛋白表達(dá)率分別為51%、53%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.

14、Capecitabine血清中有效成分主要為5'-DFUR；S-1血清中有效成分主要為5-FU。
　　2.細(xì)胞系 SHEE、SHEEC放射增敏實(shí)驗(yàn)最佳照射劑量2Gy，最佳檢測(cè)抑制率時(shí)間增敏后144h。
　　3.放射增敏研究：
　　（1）Capecitabine對(duì)細(xì)胞系SHEEC具有選擇性放射增敏作用，對(duì)細(xì)胞系SHEE無明顯放射增敏作用。
　?。?）5'-DFUR對(duì)細(xì)胞系SHEE及SHEEC放射增敏作用與卡培他濱結(jié)

15、果一致。
　　（3）S-1對(duì)細(xì)胞系SHEE及SHEEC均有放射增敏作用，不具有選擇性。
　?。?）5-FU對(duì)細(xì)胞系SHEE及SHEEC放射增敏作用與S-1結(jié)果一致。
　　Capecitabine、5'-DFUR可能更適用于食管癌的放射增敏。
　　4.凋亡蛋白表達(dá)研究：
　?。?）Capecitabine對(duì)細(xì)胞系SHEEC的放射增敏可能主要為凋亡損傷，對(duì)細(xì)胞系SHEE凋亡損傷較小。
　?。?）S-1對(duì)細(xì)