5-FU干擾下膜聯(lián)蛋白-Ⅱ、VEGF在HepG2肝癌細(xì)胞系中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　 原發(fā)性肝癌是病死率很高的惡性消化道腫瘤之一，我國肝癌死亡人數(shù)居世界之首，其中約90％為肝細(xì)胞性肝癌（hepatocellular carcinoma HCC），其治療效果差和死亡率高的關(guān)鍵因素就是肝癌細(xì)胞的高侵襲轉(zhuǎn)移能力。目前，腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移分子學(xué)機(jī)制是腫瘤治療學(xué)研究的焦點(diǎn)之一，腫瘤新生血管的生成、細(xì)胞外基質(zhì)的降解及細(xì)胞粘附等是目前研究比較深入的主要機(jī)制。已有研究證實(shí)，膜聯(lián)蛋白家族（Annexin，ANXA）及

2、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（Vascular endothelial growth factor VEGF）在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制中發(fā)揮重要作用，但其具體作用機(jī)制及兩者在機(jī)制中的相互作用尚不清楚。ANXA2是ANXA家族中的重要成員，其在諸多腫瘤（大腸癌、肺癌、胃癌、食管癌、前列腺癌、白血病、多發(fā)性骨髓瘤、宮頸癌、甲狀腺癌）的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制中發(fā)揮重要作用，目前關(guān)于ANXA2在肝癌中表達(dá)的研究甚少。VEGF是體內(nèi)最強(qiáng)的一種血管生成因子，直接參與誘導(dǎo)

3、腫瘤血管生成，已有研究證實(shí)VEGF及其受體VEGFR在肝癌組織較正常肝組織表達(dá)明顯增強(qiáng)，在肝癌的生長、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)中發(fā)揮重要作用。本研究通過對(duì)不同劑量5-氟尿嘧啶(5-FU)干預(yù)下，ANXA2、VEGF在HepG2肝癌細(xì)胞系中表達(dá)的情況及HepG2肝癌細(xì)胞侵襲能力與生長活力變化的研究，探討兩者在HCC中表達(dá)的相關(guān)性及意義，為闡明HCC侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制及治療方向和預(yù)后判斷提供新的思路。
　　 材料和方法:
　　 應(yīng)用MTT

4、（四唑鹽比色試驗(yàn)）、Transwell（細(xì)胞體外侵襲試驗(yàn)）、RT-PCR、WesternBlot，免疫組化方法檢測在不同5-FU劑量(1:對(duì)照組，2：50ug/ml,3:100ug/ml,4:200ug/ml，5：400ug/ml)干擾下，HepG2肝癌細(xì)胞系中ANXA2、VEGF的表達(dá)以及兩者的相關(guān)性，同時(shí)觀測HepG2肝癌細(xì)胞侵襲能力與生長活力變化。
　　 結(jié)果:
　　 MTT方法檢測HepG2肝癌細(xì)胞生長抑制率隨著

5、5-FU劑量的增加逐漸增加，各劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Transwell檢測HepG2肝癌細(xì)胞侵襲力隨著5-Fu劑量的增加明顯降低，各劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；RT-PCR檢測HepG2肝癌細(xì)胞中ANXA2、VEGF mRNA的表達(dá)量隨著5-FU劑量的增加逐漸下降，各劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且兩者表達(dá)量具有顯著正相關(guān)性，spearman相關(guān)系數(shù)為rp=0.900;WesternB

6、lot檢測HepG2肝癌細(xì)胞中ANXA2、VEGF蛋白質(zhì)的表達(dá)量隨著5-FU劑量的增加逐漸下降，各劑量組間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且兩者表達(dá)量具有正相關(guān)性，spearman相關(guān)系數(shù)為rw=0.856;免疫組化檢測ANXA2、VEGF在細(xì)胞中的表達(dá)隨著5-Fu劑量的增加逐漸下降，各劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 隨著5-FU劑量的逐漸增加，HepG2肝癌細(xì)胞侵襲力及細(xì)胞生長