ω-3多不飽和脂肪酸對(duì)人胃癌細(xì)胞系生長(zhǎng)的影響及提高5-Fu療效的研究.pdf

1、該研究以人胃腺癌細(xì)胞系作為研究對(duì)象,觀察ω-3PUFA對(duì)體外培養(yǎng)胃癌細(xì)胞和裸鼠人胃癌移植瘤生長(zhǎng)的影響以及聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-FU)的腫瘤殺傷效果,并探討其作用機(jī)理.第1章ω-3PUFA對(duì)人胃癌細(xì)胞系增殖與凋亡的影響及聯(lián)合5-FU的細(xì)胞殺傷作用.目的:觀察ω-3PUFA對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響以及與化療藥物5-FU聯(lián)合應(yīng)用的細(xì)胞殺傷效應(yīng),并探討其作用機(jī)制.方法:人胃腺癌細(xì)胞系SGC-790l、MGC-803和人成纖維細(xì)胞系HLF常規(guī)培

2、養(yǎng)于含10％新生牛血清、100IU/ml青霉素和100IU/ml鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基(pH 7.2)中.以10~40μg/ml的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)作用于三種細(xì)胞12~72小時(shí).采用四甲基偶氮唑藍(lán)實(shí)驗(yàn)(MTT分析)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、片斷DNA凝膠電泳和流式細(xì)胞技術(shù)分析細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期與凋亡;硫代巴比妥酸法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量;利用熒光探針rhodamine 123測(cè)定胃

3、癌細(xì)胞線粒體跨膜電位(△ψmt);分離細(xì)胞線粒體與胞漿成分,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)分析線粒體和胞漿中細(xì)胞色素C的水平;提取細(xì)胞線粒體膜磷脂,毛細(xì)管氣相色譜法分析線粒體膜磷脂的組成:熒光光譜法測(cè)定caspase-3活性;5-FU聯(lián)合20μ∥ml EPA或DHA作用SGC-7901細(xì)胞72小時(shí),MTT法分析細(xì)胞存活力,計(jì)算5-FU的半數(shù)抑制濃度(IC<,50>).結(jié)論:ω-3PUFA能選擇性抑制人胃癌細(xì)胞系的增殖,誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡,這些作用可

4、能是通過(guò)ω-3PUFA增加脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物、阻滯細(xì)胞周期于G<,0>-G<,1>期、改變線粒體膜構(gòu)成和功能、隨后開(kāi)啟線粒體介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)在凋亡通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的.此外,ω-3PUFAs可以增強(qiáng)化療藥物5-FU對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng).ω-3PUFAs有望成為一種新的胃癌預(yù)防和輔助化療手段.第2章魚(yú)油對(duì)人胃腺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及聯(lián)合5-FU化療的實(shí)驗(yàn)研究.目的:初步觀察單用不同劑量魚(yú)油和聯(lián)合化療藥物5-FU對(duì)人胃腺癌裸鼠移植瘤的治療效果.方法:取0.

5、2ml(2×10<'6>)SGC-7901胃癌細(xì)胞懸液注入裸小鼠右側(cè)后肢根部皮下,成功建立裸小鼠人胃腺癌皮下移植瘤模型.24只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為5組:①對(duì)照組(4只):0.2ml橄欖油灌胃,每天1次;②低劑量魚(yú)油組(5只):0.1ml魚(yú)油+0.1ml橄欖油灌胃,每天1次;③高劑量魚(yú)油組(5只):0.2ml魚(yú)油灌胃,每天1次;④5-FU化療組(5只):30mg/kg體重5-FU腹腔注射,每周3次×4周,0.2ml橄欖油灌胃,每天1次;⑤魚(yú)油

6、+5-FU化療組(5只):30mg/kg體重5-FU腹腔注射,每周3次×4周,0.2ml魚(yú)油灌胃,每天1次.每4天測(cè)量移植瘤的長(zhǎng)徑(A)、短徑(B),根據(jù)公式:腫瘤體積(Ⅴ)=0.4×AB<'2>計(jì)算腫瘤的近似體積,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線.觀察動(dòng)物的生活狀態(tài)、體重改變及存活情況.實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),瘤體稱重,取腫瘤組織及化療組小腸、胃、十二指腸、肝臟常規(guī)HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察.對(duì)照組和化療組進(jìn)行外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù).結(jié)論:高劑量魚(yú)油對(duì)裸鼠人胃癌移植瘤