新合成氮雜查爾酮類衍生物對(duì)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及化療增敏作用.pdf

1、背景及目的:宮頸癌仍是目前導(dǎo)致婦女死亡的主要原因之一，高危型HPV的持續(xù)感染是其主要發(fā)病因素，盡管隨著早期的篩查及先進(jìn)的醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，宮頸癌的發(fā)生率及死亡率有所下降，但仍存在晚期及轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的預(yù)后較差的情況，主要在于細(xì)胞毒藥物對(duì)宮頸癌治療效果不顯著。目前，順鉑聯(lián)合紫杉醇的化療方案是治療晚期宮頸癌的主要手段，可延長(zhǎng)患者總生存期3個(gè)月，一旦治療失敗，缺乏二線或三線藥物；并且，多種類型的化療藥物相結(jié)合使用后耐藥等副作用現(xiàn)象仍不能有效的

2、避免。因此，很有必要開(kāi)發(fā)新的能夠增加宮頸癌化療敏感性的生物活性制劑。
　　天然的黃酮類化合物是一類廣泛存在于自然界的多酚類次生代謝產(chǎn)物，具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu),在大多數(shù)的自然植物中含量豐富,分子結(jié)構(gòu)多樣復(fù)雜，可分為：黃酮、黃酮醇、黃烷酮、黃烷酮醇、查爾酮、異黃酮、異黃酮醇、橙酮及黃烷、黃烷醇等多種類型，具有抗氧化、抗衰老、抗病毒、抗心血管疾病、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)腫瘤耐藥性以及增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)功能的多重藥理學(xué)活性。黃酮類化合物對(duì)許多惡性

3、腫瘤的體內(nèi)外生長(zhǎng)都有明顯抑制作用，對(duì)其治療機(jī)制的研究也越來(lái)越受到關(guān)注，天然的黃酮類物質(zhì)種類多樣，多以結(jié)合體的形式存在，提取過(guò)程較復(fù)雜，近年也不斷有合成的黃酮類物質(zhì)問(wèn)世。本研究使用新合成的氮雜查爾酮衍生物單獨(dú)或聯(lián)合奈達(dá)鉑，體外觀察其抑制宮頸癌Hela及Siha細(xì)胞的生長(zhǎng)作用及其對(duì)奈達(dá)鉑的增敏效應(yīng)，本研究證實(shí)了新合成的黃酮類化合物具有明顯的抗宮頸癌細(xì)胞增殖以及增敏效應(yīng)。
　　材料及方法:合成了七個(gè)具有長(zhǎng)鏈共軛結(jié)構(gòu)新型氮雜查爾酮衍生物，

4、并對(duì)其進(jìn)行了活性測(cè)定及結(jié)構(gòu)表征；MTT法檢測(cè)7種化合物分別對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效果，根據(jù)其抑制率（IC50值）進(jìn)行初篩，選擇IC50值最低的1個(gè)化合物作為下一步的實(shí)驗(yàn)藥物，進(jìn)一步觀察其對(duì)HeLa、Siha及HaCaT細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用及對(duì)奈達(dá)鉑的增敏效應(yīng)。劃痕實(shí)驗(yàn)觀察所選化合物對(duì)癌細(xì)胞的遷徙抑制效應(yīng)，倒置相差顯微鏡下觀察并拍照記錄不同濃度化合處理細(xì)胞24小時(shí)后形態(tài)的改變，流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞周期、凋亡的影響，蛋白免疫

5、印跡法（Westernblot）檢測(cè)化合物對(duì)宮頸癌細(xì)胞中p53蛋白水平的影響。
　　結(jié)果:
　　1.新合成的化合物對(duì) Hela細(xì)胞的抑制效果：7種化合物均不同程度的抑制Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)，呈濃度依賴性（IC50值為14.133μM-173.236μM），抑制強(qiáng)度依次為10g號(hào)、10f號(hào)、10b號(hào)、10a號(hào)、10d號(hào)、10e號(hào)、10c號(hào)。
　　2.10g號(hào)化合物對(duì) Hela、Siha和HaCaT細(xì)胞的抑制效應(yīng)：10g號(hào)化

6、合物對(duì)HeLa及 Siha具有明顯的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，且呈濃度依賴性，對(duì) Hela（IC50=14.133μM）細(xì)胞的抑制效應(yīng)較Siha（IC50=18.281μM）明顯，而對(duì)HaCaT（IC50=243.751μM）細(xì)胞只在較高的濃度時(shí)才表現(xiàn)出溫和的細(xì)胞毒性。
　　3.10g號(hào)化合物對(duì)奈達(dá)鉑的增敏效果：用含2μM的10g號(hào)化合物的不同濃度的奈達(dá)鉑處理Hela與Siha細(xì)胞48小時(shí)，在低濃度時(shí)其抑制率明顯高于單獨(dú)使用奈達(dá)鉑時(shí)，對(duì)Hel

7、a(IC50 NDP:2.878ng/L;NDP+10g:0.937 ng/L)的增敏效果強(qiáng)于Siha(IC50 NDP:11.204 ng/L;NDP+10g:5.927 ng/L)。
　　4.10g號(hào)化合物對(duì)細(xì)胞遷徙的影響：用15μM的10g號(hào)化合物處理Hela、Siha及 HaCaT細(xì)胞株24小時(shí)后，化合物對(duì)細(xì)胞的遷徙抑制作用為：Hela>Siha>HaCaT。
　　5.10g號(hào)化合物對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響：分別用不同濃度的

8、10g號(hào)化合物處理Hela、Siha及HaCaT細(xì)胞株24小時(shí)后,倒置相差顯微鏡下發(fā)現(xiàn)隨著化合物濃度的增加宮頸癌細(xì)胞形態(tài)逐漸趨于漂浮、死亡，HaCaT細(xì)胞無(wú)明顯變化。
　　6.10g號(hào)化合物對(duì)細(xì)胞周期及凋亡的影響：15μM的10g號(hào)化合物對(duì)Hela、Siha及HaCaT細(xì)胞株24小時(shí)后，流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Hela及Siha細(xì)胞周期明顯阻滯在G0/G1期，24小時(shí)后的HeLa、Siha及HaCaT的凋亡率（（12.483±0.4

9、9）％、（1.819±0.78）%、（0.785±0.32）%）顯著高于對(duì)照組（（0.882±0.81）%、（0.820±0.21）%、（0.084±0.41）%）。
　　7.10g號(hào)化合物對(duì)宮頸癌細(xì)胞P53蛋白表達(dá)水平的影響：15μM10g號(hào)化合物的細(xì)胞培養(yǎng)液處理宮頸癌Hela及SiHa細(xì)胞24小時(shí)后，HeLa及Siha細(xì)胞中P53蛋白的相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組（0.71±0.095、1.02±1.134）較對(duì)照組（0.53±0.071

10、、0.69±0.109）明顯增高。
　　結(jié)論:
　　1．新合成的7個(gè)氮雜查爾酮衍生物均對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖具有抑制作用。
　　2．10g號(hào)化合物對(duì)HPV18陽(yáng)性的Hela細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于對(duì)HPV16陽(yáng)性的Siha細(xì)胞，對(duì)人正常的HPV陰性的永生化表皮細(xì)胞HaCaT有溫和的細(xì)胞毒性。
　　3．10g號(hào)化合物可以明顯增加宮頸癌細(xì)胞株對(duì)奈達(dá)鉑低濃度時(shí)的化療增敏作用。
　　4.新合成的氮雜查爾酮衍生物可能是通過(guò)上