通過免疫Ro60多肽的方法建立一種新的干燥綜合征小鼠模型.pdf

1、目的:干燥綜合征是一種自身免疫病，它影響外分泌腺而導致眼干和口干等癥狀。這個疾病的致病自身抗原還不清楚，所以目前還缺乏一個好的通過主動免疫抗原而建立的動物模型。干燥綜合征病人的一個主要特點是血清中存在抗SSA/Ro60自身抗體，且該自身抗體是診斷干燥綜合征標準之一。本研究旨在通過主動免疫Ro60抗原表位多肽，建立類似人類干燥綜合征的小鼠模型并探索Ro60抗原在干燥綜合征發(fā)病機制中的作用。
　　方法:利用Titermax和CFA當佐

2、劑，分別與Ro60_316-335，Ro60_480-494抗原表位短肽混合后腳掌或皮下免疫BALB/c小鼠，對照組用PBS與各佐劑混合后免疫。利用ELISA的方法，我們檢測血清抗Ro60多肽IgG抗體以及它的亞型還有血清中的細胞因子的表達情況。在免疫前，免疫后45天和免疫后90/120天，分別檢測各組小鼠唾液和淚液分泌量以及體重變化情況。實驗在免疫后90/120天結束，從小鼠體內收獲的淚腺，唾液腺和其他組織，用來做組織化學和免疫學的評

3、估。用免疫熒光的方法來鑒定組織中的炎癥細胞浸潤情況。同時，通過免疫熒光的方法來檢測組織中自身抗體的沉積情況。最后，通過轉移免疫小鼠的IgG到正常小鼠來檢驗被免疫小鼠體內抗體的致病性。
　　結果:Ro60_316-335短肽與Titermax佐劑免疫的BALB/c小鼠，在免疫后90天出現了類似干燥綜合征的癥狀。小鼠的淚液分泌量減少，淚腺組織上出現明顯的黑色斑點，病理學顯示淚腺中腺泡形態(tài)改變，腺泡萎縮并出現多處空腔。血清中產生了抗Ro

4、60_316-335短肽的自身抗體，淚腺組織中也可以觀察到有自身抗體IgG沉淀。同時，細胞因子水平發(fā)生明顯變化，其中促炎癥因子IFN-γ和IL-17的水平有明顯的提高。同時，在淚腺組織中可以觀察到T細胞，B細胞，巨噬細胞和中心粒細胞浸潤。與免疫Ro60_316-335短肽的小鼠不同的是:免疫Ro60_480-494多肽免疫小鼠和對照組小鼠并沒出現以上的癥狀。最后，如果把佐劑改變?yōu)镃FA佐劑后，Ro60_316-335多肽免疫的小鼠僅產生

5、抗Ro60_316-335多肽的自身抗體，但并無其它病理和功能改變。而轉移免疫小鼠的IgG到正常小鼠并不能導致小鼠外分泌功能降低。
　　結論:通過Ro60_316-335短肽與Titermax佐劑免疫，我們成功地建立了一個新的干燥綜合征的小鼠模型。該模型為進一步研究干燥綜合征的發(fā)病機制及診斷治療方法奠定了基礎。同時，這個模型的成功建立也證明了針對Ro60的自身免疫反應在干燥綜合征的發(fā)病過程中起到了一定的作用。而這個作用不僅和Ro6