再生障礙性貧血患者Treg-Th17細(xì)胞失衡及臍帶MSCs對(duì)其調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)再生障礙性貧血(aplasticanemia，AA)患者外周血Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞占單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)的百分比，初步闡明Treg/Th17細(xì)胞失衡在AA發(fā)病機(jī)制中的作用及意義。并采用組織塊平鋪法進(jìn)行臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilical cord-derived mesenchymal stemcells，UC-MSCs)的原

2、代分離與培養(yǎng)，探討UC-MSCs對(duì)AA患者Treg/Th17細(xì)胞失衡的調(diào)節(jié)。
　　方法：
　　1、UC-MSCs的分離培養(yǎng)和鑒定:取足月正常分娩或剖腹產(chǎn)的新生兒臍帶，采用組織塊平鋪法分離、培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。采用流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)表面CD34、CD45、CD90、CD105的表達(dá)。
　　2、FCM檢測(cè)10例健康對(duì)照者、15例AA患者外周血Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞分別占PBMCs的

3、百分比，比較Treg/Th17細(xì)胞的比率。
　　3、將AA患者的PBMCs與UC-MSCs共培養(yǎng)72h，檢測(cè)AA患者單獨(dú)培養(yǎng)組和與UC-MSCs共同培養(yǎng)組Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞分別占 PBMCs的百分比，比較Treg/Th17比率的變化。
　　結(jié)果：
　　1、經(jīng)FCM鑒定MSCs表面標(biāo)記CD90、CD105陽(yáng)性率≥98％，CD34、CD45陽(yáng)性率≤1％。
　　2、AA患者組外周血Treg細(xì)胞百分率明顯低于健康

4、對(duì)照組(P＜0.05)，Th17細(xì)胞百分率明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.05)，Treg/Th17細(xì)胞比率明顯低于健康對(duì)照組(P＜0.05)。
　　3、AA患者的PBMCs與UC-MSCs共培養(yǎng)后， Treg細(xì)胞百分率明顯高于單獨(dú)培養(yǎng)組(P＜0.05)，Th17細(xì)胞百分率明顯低于單獨(dú)培養(yǎng)組(P＜0.05)，Treg/Th17細(xì)胞比率較單獨(dú)培養(yǎng)組明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、AA患者外周血Treg細(xì)胞百分