GIT2抑制TLR介導(dǎo)的炎癥反應(yīng).pdf

1、Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)信號通路通過識別病原菌相關(guān)的分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)在宿主的先天免疫過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，如細菌DNA、LPS以及雙鏈RNA等。如果TLR信號通路失控，就會導(dǎo)致核因子-κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)活性的持續(xù)激活，進而導(dǎo)致慢性炎癥以及自身免疫疾病等。因此，TLR信號

2、負調(diào)控對于維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。
　　G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用因子2(G-coupled receptor kinase-interactor2，GIT2)是ARF-GAP(GTPase activating proteins)家族成員之一。到目前為止，還沒有關(guān)于ARF-GAP家族成員直接調(diào)控TLR信號通路活性的報道。GIT2可通過其Arf-GAP酶活性負調(diào)控GTP酶Arf或通過與PIX相互作用負調(diào)控GTP酶Rac的活性。

3、做為多結(jié)構(gòu)域蛋白，GIT2參與多種細胞生物學(xué)過程，如調(diào)控細胞骨架、參與受體的內(nèi)化以及作為支架蛋白參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。研究表明Git2缺失導(dǎo)致機體免疫缺陷:脾腫大、中性粒細胞趨化性紊亂以及過氧離子產(chǎn)生增加、CD4單陽胸腺細胞的選擇受損等。上述結(jié)果表明GIT2在免疫調(diào)控中具有重要作用。我們前期通過酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)GIT2可與NF-κB信號通路中的很多蛋白發(fā)生相互作用，這提示GIT2直接調(diào)控NF-κB通路活性。但是，GIT2是否直接調(diào)控NF-κB

4、活性以及調(diào)控NF-B通路的生理和病理作用不清楚。
　　NF-κB的活化是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。因此，我們首先利用Git2缺失小鼠通過LPS內(nèi)毒素休克模型研究GIT2在全身性炎癥反應(yīng)中的作用。研究發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠相比，Git2缺失小鼠對LPS引起的內(nèi)毒素休克易感性增強，主要表現(xiàn)在:致死率增加、促炎性細胞因子水平的分泌以及肺組織中環(huán)氧化酶2(Cyclooxygenase2，COX2)陽性數(shù)目的顯著增加、脾腫大以及嚴重的肺損傷。此外

5、，我們又研究了GIT2在大腸桿菌感染引起的膿毒性腹膜炎中的作用。Git2缺失小鼠除表現(xiàn)出與內(nèi)毒素休克相類似的病理特征外，還表現(xiàn)出病原菌清除能力的降低。上述結(jié)果表明GIT2能保護小鼠免于內(nèi)毒休克以及膿毒性腹膜炎，是膿毒癥的重要抑制因子。
　　鑒于GIT2在調(diào)控內(nèi)毒素休克和膿毒性腹膜炎中調(diào)控作用，我們接下來利用巨噬細胞研究GIT2調(diào)控TLR介導(dǎo)的信號通路的機制。通過骨髓源巨噬細胞(Bonemarrow-derived macropha

6、ges，BMDMs)，我們發(fā)現(xiàn)在LPS或Pam3CSK4的刺激下，Git2缺失的BMDMs產(chǎn)生炎性細胞因子能力顯著高于野生型。在鼠胚胎成纖維細胞（mouse embryonic fibroblasts，MEFs）中也得到了類似的結(jié)果。當(dāng)加入TLR信號通路的抑制劑（TAK-242或OxPAPC）后，Git2-/-BMDMs在LPS或Pam3csk4刺激下產(chǎn)生炎性細胞因子的能力顯著下降，與野生型BMDMs的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這表明GIT2負

7、調(diào)控TLR介導(dǎo)的NF-κB活性。
　　前期的研究表明GIT2負調(diào)控NF-κB活性的機制在于GIT2通過與TRAF6相互作用募集去泛素化酶CYLD特異性去除TRAF6 K63位的多聚泛素化鏈。為進一步說明GIT2負調(diào)控NF-κB活性在炎癥反應(yīng)中的作用，我們選擇了硫酸葡聚糖鈉（Dextran sulfate sodium，DSS）-誘導(dǎo)的實驗性腸炎模型進行實驗。與野生型小鼠相比，Git2缺失小鼠易發(fā)DSS誘導(dǎo)的實驗性腸炎。其主要表在:

8、致死率增加、體重減輕、結(jié)腸長度變短、炎性細胞因子含量增加，結(jié)腸組織病變嚴重;在抗生素干預(yù)下，野生型小鼠和Git2缺失小鼠的結(jié)腸病理損傷程度無統(tǒng)計學(xué)差異，提示Git2缺失導(dǎo)致的結(jié)腸炎易感性增強依賴于腸道菌群對NF-κB的直接或間接激活，尤其是TLR信號通路;同時，Git2缺失促進慢性結(jié)腸炎的發(fā)病。
　　綜上所述，我們的結(jié)果表明GIT2能直接調(diào)控TLR介導(dǎo)的NF-κB信號通路;Git2缺陷小鼠中，內(nèi)毒素誘導(dǎo)的全身性炎癥反應(yīng)、大腸桿菌感