TLR2與TLR4配體預(yù)處理對角膜基質(zhì)細(xì)胞抗煙曲霉菌炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、研究背景:真菌性角膜炎是一種致盲率極高的感染性角膜病變，我國屬與該疾病高發(fā)區(qū)域，相關(guān)的臨床流行病學(xué)調(diào)查顯示其發(fā)病率逐年上升，因此，防治真菌性角膜炎成為我國致盲性眼科疾病的重要臨床課題。
　　 真菌性角膜炎致盲的重要原因之一就是真菌感染后，固有免疫所致的過度炎癥反應(yīng)。隨著研究的深入，Toll樣受體家族在角膜防御真菌感染過程中發(fā)揮的重要作用逐漸為人發(fā)現(xiàn)并重視。TLR2在與TLR4在抗真菌免疫應(yīng)答中占有著重要地位，TLR2可識別酵母聚

2、糖，TLR4可識別脂多糖。隨后的研究指出以低濃度TLRs配體預(yù)處理誘導(dǎo)細(xì)胞，可以使其對再次“致死性”刺激反應(yīng)性下降和炎性細(xì)胞因子分泌減少，該現(xiàn)象曾被稱為“TLR耐受”。TLR預(yù)處理抑制多形核白細(xì)胞過度炎癥反應(yīng)的研究已有較多報道，但其在角膜細(xì)胞抗過度炎癥反應(yīng)的研究中較少，不同TLR配體協(xié)同耐受的研究更是鮮有報道。
　　 目的:研究酵母聚糖（Zymosan，TLR2特異性配體）單獨預(yù)處理或與脂多糖（LPS，TLR4特異性配體）聯(lián)合預(yù)

3、處理，對角膜基質(zhì)細(xì)胞抗煙曲霉菌炎癥反應(yīng)的影響。
　　 方法:培養(yǎng)人永生化角膜基質(zhì)纖維細(xì)胞(telomerase-immortatizedhumancorneastromafibroblast，THSF)，以4×105個細(xì)胞／孔的濃度接種于6孔板，以不同濃度Zymosan(104ng/ml、103ng/ml、100ng/ml、10ng/ml)預(yù)處理角膜基質(zhì)細(xì)胞12h，然后給予大劑量煙曲霉菌刺激4h，收取細(xì)胞，通過RT-PCR分析比

4、較不同濃度Zymosan預(yù)處理對角膜基質(zhì)細(xì)胞炎性因子(TNF-α，IL-6)表達(dá)的影響。以4×105個細(xì)胞／孔的濃度將永生化角膜基質(zhì)細(xì)胞接種于6孔板，給與不同濃度Zymosan與LPS(103ng/mlZymosan+10ng/mlLPS、100ng/mlZymosan+10ng/mlLPS)聯(lián)合預(yù)處理，分別在預(yù)處理6h，12h，18h，24h，30h后，給予大劑量煙曲霉菌刺激4h，收取6孔板中的細(xì)胞上清，通過RT-PCR檢測角膜基質(zhì)細(xì)

5、胞炎性因子（TNF-α，IL-6和IL-8）基因水平表達(dá);收取基質(zhì)細(xì)胞，通過ELISA檢測培養(yǎng)液上清中炎性因子蛋白的分泌量，分析Zymosan與LPS聯(lián)合預(yù)處理對角膜基質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)分析，以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用獨立樣本t檢驗與ANOVA分析比較各組間差異，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:1.1000ng/mlZymosan最大程度的抑制了TNF-α和IL-6的分泌。在一