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1、目的:觀察正常小鼠足細(xì)胞上TLR的表達(dá)情況及TLR4在其配體LPS介導(dǎo)的足細(xì)胞損傷中所起的作用及其可能的信號(hào)通路。
方法:用RT-PCR檢測(cè)正常培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞表面TLRmRNA的表達(dá)情況。根據(jù)小鼠足細(xì)胞與LPS共同孵育時(shí)間把足細(xì)胞分為4組:0h組、3h組、6h組和16h組;按刺激所用LPS濃度把足細(xì)胞分為3組:0μg/ml組、10μg/ml組和20μg/ml組。用流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR和WesternBlot分別檢測(cè)各組足
2、細(xì)胞的凋亡情況及TLR4、MyD88、TRIF和caspase8的mRNA與蛋白水平的表達(dá)變化。
結(jié)果:正常小鼠足細(xì)胞上有TLR1、TLR2、TLR3和TLR4的mRNA表達(dá)。LPS刺激后足細(xì)胞有較低水平凋亡現(xiàn)象,以6小時(shí)凋亡現(xiàn)象最明顯且隨著濃度增加而增加。不同濃度LPS刺激小鼠足細(xì)胞后,MyD88、TRIF和caspase8的核酸及蛋白表達(dá)隨濃度增加而增多。
結(jié)論:LPS可通過(guò)TLR4的兩條信號(hào)通路激活caspas
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