Delftia tsuruhatensis MTQ3及其tetR缺失突變株的轉(zhuǎn)錄組分析.pdf

1、本研究以在煙草根際土壤中篩選到的Delftia tsuruhatensis MTQ3為研究對(duì)象,進(jìn)行MTQ3拮抗分子機(jī)制的相關(guān)研究。
　　應(yīng)用三親本雜交的方法驗(yàn)證了調(diào)控tetR基因和MTQ3拮抗作用相關(guān)。將帶有tetR基因的重組質(zhì)粒PBR322-T導(dǎo)入突變株MTQ3-ΔT,獲得重組菌株MTQ3-ΔT-P。采用對(duì)峙平板法,檢測(cè)MTQ3、MTQ3-ΔT、MTQ3-ΔT-P的拮抗能力。對(duì)MTQ3進(jìn)行了抑菌驗(yàn)證,并將MTQ3培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)

2、化,使MTQ3在煙草青枯病病原菌平板上產(chǎn)生的抑菌圈最大,同時(shí)測(cè)定了MTQ3生長(zhǎng)曲線。結(jié)果表明,MTQ3-ΔT-P完全恢復(fù)了拮抗能力,證實(shí)了tetR基因與MTQ3的拮抗性能有關(guān),MTQ3對(duì)煙草青枯病病原菌具有穩(wěn)定的拮抗能力,得到了MTQ3最優(yōu)培養(yǎng)基的配方。
　　基于Illumina HiSeq 2000測(cè)序平臺(tái),對(duì)野生菌株MTQ3和突變菌株MTQ3-ΔT進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,最終得到了6294個(gè)Unigene。通過(guò)在數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)分析,得到

3、了差異顯著的1428個(gè)Unigene。其中,突變菌株相對(duì)于野生菌株上調(diào)的差異基因有290個(gè),下調(diào)的差異基因有1138個(gè)。發(fā)現(xiàn)了一些和NRPS合成相關(guān)的基因簇。在Pathway的富集結(jié)果中,發(fā)現(xiàn)將野生菌株MTQ3插入轉(zhuǎn)座子突變之后,與CoA合成、氨基酸合成和脂肪酸合成相關(guān)基因普遍下調(diào)。所以我們推測(cè)調(diào)控基因tetR直接或間接調(diào)控產(chǎn)生的物質(zhì)可能為脂肽類抗生素,脂肽的肽骨架可能是NRPS途徑合成的,我們接下來(lái)會(huì)對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行進(jìn)一步的功能驗(yàn)證。<