無(wú)角間性奶山羊PISRT1和FOXL2基因及PIS區(qū)域研究.pdf

1、無(wú)角間性綜合癥(Polled Intersex Syndrome，PIS)是由于一段位于1q23的11.7kbDNA序列的缺失導(dǎo)致山羊無(wú)角與間性緊密連鎖的一種疾病。研究發(fā)現(xiàn)，11.7kb的DNA片段為非編碼序列，但表現(xiàn)出轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用，被調(diào)控的基因至少存在2個(gè):PIS區(qū)調(diào)控的第一個(gè)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物PISRT1（PIS regulated transcript number1）和叉頭蛋白FOXL2（forkhead box L2）。山羊PISRT

2、1基因不編碼蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)錄水平發(fā)揮其功能，目前已初步認(rèn)定為睪丸抑制因子。FOXL2基因編碼一個(gè)典型的叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子，具有決定卵巢發(fā)育的作用。
　　PIS區(qū)域的缺失并不是引起山羊間性的唯一原因，為探究山羊間性的作用機(jī)制，本研究從唐山奶山羊的性別鑒定入手，探究了奶山羊性別遺傳學(xué)基礎(chǔ);對(duì)PISRT1和FOXL2基因多態(tài)性進(jìn)行分析并探究?jī)苫蛟陂g性和正常奶山羊中的變異差異以及兩基因的相互作用關(guān)系;使用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)了山羊PISRT1

3、、FOXL2基因的啟動(dòng)子區(qū)，并對(duì)FOXL2基因啟動(dòng)子區(qū)進(jìn)行了活性分析。
　　通過(guò)對(duì)34只間性奶山羊性別決定基因SRY的PCR擴(kuò)增結(jié)果表明，所有的間性山羊均為，RY基因缺失，間性奶山羊是由雌性性反轉(zhuǎn)雄性化的結(jié)果。
　　利用PCR技術(shù)對(duì)33個(gè)間性奶山羊和28個(gè)正常奶山羊的PISRT1基因的序列分析表明，唐山奶山羊PISRT1基因存在兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)g.7032G＞A與g.7049G＞C，并且兩位點(diǎn)為完全連鎖。間性山羊CC基因型頻率(

4、0.667)與CG基因型頻率(0.333)相比占明顯優(yōu)勢(shì)，間性和正常山羊個(gè)體獨(dú)立卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示該基因型在間性個(gè)體和正常個(gè)體之間差異極顯著(P＜0.01)。有角山羊GG基因型頻率(0.857)高于CC基因型頻率(0.143)，且有角和無(wú)角個(gè)體獨(dú)立卡方檢驗(yàn)結(jié)果顯示有角和無(wú)角個(gè)體之間差異極顯著(P＜0.01)。山羊PISRT1基因型的分布與山羊性別和角的表型密切相關(guān)，但不完全符合Z模型假說(shuō)。使用SPSS分析PISRT1基因和FOXL2基因不

5、同基因型的相關(guān)性，結(jié)果表明正常山羊兩基因相關(guān)性不顯著（相關(guān)系數(shù)為-0.093，P＞0.05）;間性個(gè)體的兩基因相關(guān)性極顯著（相關(guān)系數(shù)為0.688，P＜0.001）。由此可知，PISRT1基因和OXL2基因不同基因型間的相互作用與山羊無(wú)角綜合癥緊密相關(guān)。
　　使用不同的啟動(dòng)子預(yù)測(cè)軟件對(duì)PISRT1基因的啟動(dòng)子預(yù)測(cè)結(jié)果并不唯一，在-1558位置發(fā)現(xiàn)一個(gè)TATA-box，-1528位置找到一個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)TSS，在-1757位置發(fā)現(xiàn)了與

6、RNA聚合酶密切聯(lián)系的NFI/CTF轉(zhuǎn)錄因子，以及能夠和上游啟動(dòng)子元件CAAT框和GC框相結(jié)合的TFIID轉(zhuǎn)錄因子。由此推測(cè)該基因的啟動(dòng)子是依據(jù)TATA盒為核心啟動(dòng)元件，-1700至-50區(qū)段推測(cè)為PISRT1基因的啟動(dòng)子候選區(qū)段。
　　對(duì)FOXL2基因構(gòu)建啟動(dòng)子缺失載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的啟動(dòng)子活性分析結(jié)果表明，F(xiàn)OXL2基因-934/+324區(qū)域表現(xiàn)轉(zhuǎn)錄活性，-32/+324區(qū)段為轉(zhuǎn)錄的基本元件;-934/-456區(qū)域在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中起負(fù)調(diào)