小瞼裂綜合征治療方案分析及FOXL2基因編碼區(qū)突變的檢測與功能研究.pdf

1、目的：
　　1.通過回顧分析小瞼裂綜合征患者的臨床治療情況，探索小瞼裂綜合征分期治療的選擇策略。
　　2.通過采集小瞼裂綜合征患者的血液樣本，探尋在患者群中是否存在FOXL2編碼區(qū)新的基因突變。
　　3.對于新發(fā)現(xiàn)的小瞼裂綜合征FOXL2編碼區(qū)突變，通過構(gòu)建質(zhì)粒來研究突變位點的危害性。
　　方法：
　　1.通過回顧分析2008年1月至2016年4月就診于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院整形三科的小瞼裂綜合征患者治

2、療方案，對患者術(shù)前及術(shù)后的水平瞼裂長度(horizontal palpebral fissure length，HPFL)、垂直瞼裂高度(vertical palpebral fissureheight，VPFH)、內(nèi)眥間距(inner intercanthal distance，IICD)及內(nèi)眥間距與水平瞼裂長度比(the ratio of IICD to HPFL，IICD/HPFL)進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　2.采集臨床小瞼裂綜

3、合征患者家系及散發(fā)患者外周血，提取基因組DNA，運用Sanger測序及毛細管電泳測序法對樣本進行檢測，測序結(jié)果使用Chromas、DNASTAR及GeneMapper V3.5軟件進行分析。
　　3.構(gòu)建攜帶野生型FOXL2基因的質(zhì)粒pEGFP-N1-WT(WT)、攜帶c.274G＞T突變型FOXL2基因的質(zhì)粒pEGFP-N1-M1(M1)、攜帶c.1793del突變型FOXL2基因的質(zhì)粒pEGFP-N1-M2(M2)及攜帶c.9

4、71C＞T突變型FOXL2基因的質(zhì)粒pEGFP-N1-M3(M3)共4種，將上述質(zhì)粒及空載質(zhì)粒pEGFP-N1-Control(Control)轉(zhuǎn)染于HEK-293T細胞中，利用熒光顯微鏡觀察編碼蛋白質(zhì)的表達情況，同時運用定量PCR(RT-PCR)方法測定FOXL2基因及靶基因OSR2與α-SMA的改變。
　　結(jié)果：
　　1.本研究分析了45位小瞼裂綜合征患者的治療方案，患者年齡分布為10個月～21歲，其中女性24人，男性2

5、1人。所有患者術(shù)前與術(shù)后HPFL，VPFH，IICD及IICD/HPFL的變化差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.00)。一期手術(shù)患者與二期手術(shù)患者初次手術(shù)年齡的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.00)，年齡均值分別為(14±5.48)與(4.59±4.64)歲。
　　2.本研究共收集并檢測小瞼裂綜合征患者樣本24例，其中家系2個，散發(fā)患者11例;其中家系A(chǔ)均存在c.672_701dup30(p.Ala224_Ala234dup10)突變，家系B

6、均存在c.672_701dup30(p.Ala224_Ala234dup10)突變;散發(fā)患者中共發(fā)現(xiàn)新的突變位點5個，分別為c.274G＞T(p.E92*)、c.17_93del(p.E9Rfs*61)、c.971C＞T(p.P324L)、c.931C＞T(p.H311 Y)及c.655C＞A(p.Q219K)。
　　3.實驗結(jié)果表明:攜帶FOXL2基因突變位點c.274G＞T(p.E92*)、c.17_93del(p.E9Rfs

7、*61)、c.971C＞T(p.P324L)的質(zhì)粒M1、M2、M3所編碼蛋白質(zhì)無法在細胞核內(nèi)正確定位;攜帶FOXL2基因突變位點c.274G＞T(p.E92*)、c.17_93del(p.E9Rfs*61)的質(zhì)粒M1、M2影響眼瞼發(fā)育相關(guān)基因OSR2及α-SMA表達，攜帶突變位點c.971C＞T(p.P324L)的質(zhì)粒M3僅影響OSR2表達。
　　結(jié)論：
　　1.通過研究我們發(fā)現(xiàn)，在充分的術(shù)前評估基礎(chǔ)上，一期手術(shù)治療與二期手

8、術(shù)治療同樣都能取得滿意的治療效果。在接受手術(shù)治療的患者中，初次手術(shù)年齡對于治療方案的選擇產(chǎn)生了影響。
　　2.我們在研究中共發(fā)現(xiàn)5種新發(fā)突變:c.17_93del(p.E9Rfs*61)、c.274G＞T(p.E92*)、c.971C＞T(p.P324L)、 c.931C＞T(p.H311Y)和c.655C＞A(p.Q219K)，我們的研究擴大了小瞼裂綜合征FOXL2基因的突變譜。
　　3.FOXL2基因突變位點c.274G